Differenza tra ELISA diretto e indiretto

Differenza chiave - ELISA diretto o indiretto
 

Un saggio immunologico collegato a un enzima (ELISA), noto anche come saggio immunoenzimatico, è un test sierologico che rileva gli anticorpi nel sangue. È usato come strumento diagnostico per scoprire se il paziente è stato esposto a un particolare tipo di virus o altro agente infettivo (antigene) e se il corpo ha prodotto anticorpi contro l'infezione. ELISA può anche identificare le infezioni passate e attuali. Quindi, il test ELISA viene spesso utilizzato dai medici come test di prescreening prima di un'analisi approfondita delle malattie. Questo test può essere eseguito in laboratorio prelevando un campione di sangue dal paziente. Esistono due tipi di test ELISA: ELISA diretto e ELISA indiretto. La differenza fondamentale tra ELISA diretto e indiretto è quella l'ELISA indiretto è più sensibile e richiede l'aggiunta di un anticorpo secondario mentre diretto ELISA è meno sensibile e utilizza solo un anticorpo primario.

CONTENUTO
1. Panoramica e differenza chiave
2. Cos'è Direct ELISA
3. Cos'è l'ELISA indiretto
4. Confronto affiancato - ELISA diretto o indiretto
5. Sommario

Cos'è Direct ELISA?

ELISA è un test diagnostico della malattia eseguito per identificare la presenza di particolari antigeni o anticorpi nel sangue. È fatto come un test piastra. Usa anticorpi legati ad enzimi facilmente dosati. La presenza di antigeni nel campione di siero si lega con anticorpi specifici legati agli enzimi. Nella fase finale, viene aggiunto un substrato specifico per reagire con l'enzima. L'enzima converte il substrato in un prodotto colorato o segnale. Il cambiamento di colore nel substrato chimico rivela la presenza di un particolare anticorpo nel campione di siero. Il test ELISA diretto utilizza solo un anticorpo primario collegato all'enzima. Quando si lega all'antigene, cambia rapidamente il colore, indicando la presenza dell'agente infettivo nel sangue. Tuttavia, l'intensità dei segnali è più debole nell'ELISA diretto poiché gli epitopi sono limitati al legame degli antigeni. Quindi, l'ELISA diretto è meno sensibile rispetto all'ELISA indiretto.

Figura 01: test ELISA diretto

Cos'è l'ELISA indiretto?

ELISA può essere eseguito utilizzando due tipi di anticorpi in particolare; anticorpo primario e anticorpo secondario. Lo strumento ELISA indiretto utilizza entrambi i tipi di anticorpi per amplificare i segnali per una migliore rilevazione. La tecnica indiretta ELISA viene eseguita come segue.

1. Le piastre sono incubate con antigeni e lavate per bloccare il legame non specifico.
2. Quindi gli anticorpi primari vengono aggiunti e lavati.
3. L'anticorpo secondario legato all'enzima viene aggiunto e lavato.
4. Viene aggiunto un substrato e gli viene permesso di reagire con gli enzimi.
5. I segnali vengono rilevati e viene identificata la presenza o l'assenza dell'antigene specifico nel campione.

Nel test ELISA indiretto, diversi anticorpi secondari possono legarsi a un singolo anticorpo primario. Gli anticorpi secondari sono collegati con enzimi facilmente dosati. Pertanto, un legame può dare un segnale forte a causa di più di una interazione. Pertanto, l'ELISA indiretto è più sensibile rispetto all'ELISA diretto. Tuttavia, l'ELISA indiretto può produrre segnali non specifici a causa di reazioni incrociate degli anticorpi secondari.

Figura 02: test ELISA indiretto

Qual è la differenza tra ELISA diretto e indiretto?

Diretto vs indiretto ELISA
L'ELISA diretto è meno sensibile rispetto all'ELISA indiretto.	L'ELISA indiretto è più sensibile.
Tempo preso
Il test ELISA diretto è un processo rapido.	L'ELISA indiretto richiede molto tempo.
Uso di anticorpi
Solo un tipo di anticorpi (anticorpi primari) sono utilizzati nell'ELISA diretto.	Anticorpi primari e secondari sono usati per ELISA indiretto.
Collegamento con Enzimi
Gli anticorpi primari sono collegati con gli enzimi.	Gli anticorpi secondari sono collegati con gli enzimi.
Reattività incrociata dei secondi anticorpi
L'ELISA diretta elimina la cross-reattività dei secondi anticorpi.	L'ELISA indiretto è affetto da cross-reattività dei secondi anticorpi.
segnali
I segnali sono deboli rispetto all'ELISA indiretto.	I segnali sono amplificati in ELISA indiretto. Quindi, è facile da rilevare.

Riepilogo - ELISA diretto o indiretto

ELISA è una tecnica biochimica utilizzata principalmente in immunologia per rilevare la presenza di un anticorpo o di un antigene in un campione di sangue di un paziente. Può essere eseguito tramite due processi noti come ELISA diretto o indiretto. Il test ELISA diretto utilizza solo anticorpi primari per rilevare l'antigene mentre l'ELISA indiretto utilizza anticorpi sia primari che secondari. Nell'ELISA diretto, gli anticorpi primari sono etichettati mentre gli anticorpi secondari ELISA indiretti sono etichettati. Questa è la differenza tra ELISA diretto e indiretto.

Riferimenti
1. "Il saggio di immunoassorbimento legato all'enzima (ELISA)." Bollettino dell'Organizzazione Mondiale della Sanità. U.S. National Library of Medicine, 1976. Web. 29 marzo 2017
2. Loon, A. M van, J. T Van Der Logt, F. W. Heessen e J. Van Der Veen. "Saggio immunoassorbente legato all'enzima che utilizza l'antigene marcato per il rilevamento degli anticorpi immunoglobuline M e A nella toxoplasmosi: confronto con immunofluorescenza indiretta e saggio di immunoassorbimento enzimatico doppio-sandwich". Journal of Clinical Microbiology. U.S. National Library of Medicine, giugno 1983. Web. 29 marzo 2017

Cortesia dell'immagine:
1. "Diagramma ELISA" di Cavitri - Opera propria (CC BY 3.0) attraverso Commons Wikimedia 
2. "ELISA indiretto" di Cawang - Opera propria (CC0) via Commons Wikimedia