Differenza tra immunofluorescenza diretta e indiretta

Il differenza fondamentale tra immunofluorescenza diretta e indiretta è che il l'immunofluorescenza diretta utilizza un singolo anticorpo che agisce contro l'obiettivo di interesse mentre l'immunofluorescenza indiretta utilizza due anticorpi per etichettare l'obiettivo di interesse.

Immunofluorescenza o imaging cellulare è una tecnica che viene utilizzata per etichettare un antigene bersaglio specifico con un fluoroforo. Qui, il fluoroforo è un composto chimico fluorescente che può ri-emettere luce su eccitazione luminosa. Quando un fluoroforo si lega con l'antigene bersaglio, consente il rilevamento della molecola bersaglio nel campione. Per descriverlo ulteriormente, quando un antigene si lega con un anticorpo specifico, può essere coniugato con fluorofori. Quindi, è facile rilevare la presenza dell'antigene bersaglio nel campione quando si osserva sotto il microscopio a fluorescenza.

Inoltre, ci sono due tipi di immunofluorescenza; immunofluorescenza diretta e indiretta. La differenza tra l'immunofluorescenza diretta e quella indiretta si basa principalmente sul numero di anticorpi utilizzati e sulla coniugazione del fluoroforo. Cioè, in immunofluorescenza diretta, il fluoroforo si coniuga direttamente all'anticorpo primario mentre in immunofluorescenza indiretta, il coniugato fluoroforo con l'anticorpo secondario.

CONTENUTO

1. Panoramica e differenza chiave
2. Cos'è l'Immunofluorescenza diretta
3. Cos'è l'immunofluorescenza indiretta
4. Somiglianze tra immunofluorescenza diretta e indiretta
5. Confronto affiancato - Immunofluorescenza diretta vs indiretta in forma tabulare
6. Sommario

Cos'è l'Immunofluorescenza diretta?

L'immunofluorescenza utilizza anticorpi per rilevare specifici antigeni bersaglio. L'immunofluorescenza diretta è uno dei due tipi di immunofluorescenza. Nell'immunofluorescenza diretta, un singolo anticorpo (anticorpo primario) coinvolge e il fluoroforo si coniuga direttamente con l'anticorpo primario. Dopo aver legato l'anticorpo con l'antigene bersaglio, il fluoroforo emette fluorescenza che può essere rilevata da un microscopio a fluorescenza.

Figura 01: Immunofluorescenza diretta

Tuttavia, l'immunofluorescenza diretta è un metodo costoso poiché gli anticorpi coniugati primari sono costosi rispetto agli anticorpi secondari. Tuttavia, non comporta un ulteriore passo avanti, una tecnica più breve. Inoltre, i legami non specifici sono ridotti in immunofluorescenza diretta. Quindi, la reattività crociata delle specie è bassa. Ma nel rilevamento, la sensibilità dell'immunofluorescenza diretta è debole rispetto all'immunofluorescenza indiretta .

Cos'è l'immunofluorescenza indiretta?

L'immunofluorescenza indiretta è il secondo tipo di immunofluorescenza che coinvolge due tipi di anticorpi come anticorpi primari e secondari nell'etichettatura dell'antigene bersaglio. In questo metodo, il fluoroforo si coniuga con l'anticorpo secondario. Quindi, questa tecnica comporta un passaggio aggiuntivo.

Figura 02: Immunofluorescenza

Tuttavia, la sensibilità è elevata in questo metodo poiché diversi fluorofori possono essere coniugati con anticorpi secondari e facilita il rilevamento. Inoltre, l'immunofluorescenza indiretta è meno costosa a causa del fatto che la coniugazione di anticorpi secondari è meno costosa e più facile. Rispetto alla immunofluorescenza diretta, la cross-reattività delle specie è elevata nel metodo indiretto.

Quali sono le somiglianze tra immunofluorescenza diretta e indiretta?

• Sono due tipi di tecnica di immunofluorescenza.
• Anticorpi primari e fluoroforo coinvolgono entrambi i metodi.
• Inoltre, la reazione antigene-anticorpo si verifica in entrambi i metodi.
• Inoltre, sia l'immunofluorescenza diretta che quella indiretta utilizzano un microscopio a fluorescenza per il rilevamento dell'antigene.

Qual è la differenza tra immunofluorescenza diretta e indiretta?

L'immunofluorescenza può essere diretta o indiretta in base alla coniugazione del fluoroforo con gli anticorpi utilizzati. Nell'immunofluorescenza diretta, il fluoroforo si coniuga con l'anticorpo primario, che è l'anticorpo singolo che coinvolge in questa tecnica. In contrasto con ciò, nell'immunofluorescenza indiretta, il fluoroforo si coniuga con l'anticorpo secondario, che è uno dei due tipi di anticorpi che coinvolgono nella tecnica. Quindi, la principale differenza tra l'immunofluorescenza diretta e quella indiretta è il tipo di anticorpo che si coniuga con il fluoroforo.

La seguente infografica fornisce un confronto fianco a fianco della differenza tra immunofluorescenza diretta e indiretta.

Riassunto - Immunofluorescenza diretta vs indiretta

L'immunofluorescenza è una tecnica che viene utilizzata per rilevare la presenza di antigeni specifici in un campione. Questa tecnica utilizza anticorpi specifici. Pertanto, in questo, gli anticorpi si coniugano con i fluorofori per rilevarli usando un microscopio a fluorescenza. Inoltre, ci sono due tipi di immunofluorescenza, cioè l'immunofluorescenza diretta e indiretta. L'immunofluorescenza diretta coinvolge un singolo anticorpo e un fluoroforo direttamente coniugati con questo anticorpo. L'immunofluorescenza indiretta coinvolge due anticorpi; primario e secondario e fluoroforo coniugati all'anticorpo secondario. Poiché diversi anticorpi secondari possono legarsi con un anticorpo primario e diversi fluorofori possono coniugarsi con anticorpi secondari, l'immunofluorescenza indiretta è un metodo più sensibile rispetto al metodo diretto. Inoltre, il metodo indiretto è meno costoso del metodo diretto. Quindi, questa è la differenza tra immunofluorescenza diretta e indiretta.

Riferimento:

1. "Immunofluorescenza". Wikipedia, Wikimedia Foundation, 19 agosto 2018. Disponibile qui 

Cortesia dell'immagine:

1. "HSP IF IgA" di Emmanuelm su en.wikipedia, (CC BY 3.0) attraverso Commons Wikimedia
2. "Immunofluorescenza" di Westhayl618 - Opera propria, (CC BY-SA 4.0) attraverso Commons Wikimedia