Come funziona la tripsina nella coltura cellulare
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La tripsina è una serina proteasica che scinde i residui di lisina e arginina al terminale C dei peptidi. È l'enzima più utilizzato nella coltura cellulare per rilasciare le cellule aderenti dalle superfici dei vasi di coltura. La tripsina è facilmente tollerata dalla maggior parte dei tipi di cellule coltivate in coltura. La sua attività può essere facilmente neutralizzata con l'aggiunta di siero nel mezzo di coltura. Queste due caratteristiche di tripsina facilitano il loro uso nelle colture cellulari. Generalmente, la tripsina viene aggiunta alle colture cellulari con EDTA. Il ruolo della tripsina nelle colture cellulari è descritto in questo articolo.
Aree chiave coperte
1. Cos'è la tripsina
- Definizione, Caratteristiche, Funzione
2. Come funziona la tripsina nella coltura cellulare
- Ruolo della tripsina nella coltura cellulare
Termini chiave: Proteine adesive, adesione cellulare, enzima digestivo, tripsina, tripsinizzazione
Cos'è la tripsina
La tripsina è un enzima digestivo che scompone le proteine nel sistema digestivo di molti vertebrati. Si trova nel succo pancreatico. La tripsina fende residui di lisina e arginina del terminale carbossitico dei peptidi. Tuttavia, non li separa quando questi due aminoacidi sono seguiti dalla pralina. L'attività della tripsina è utilizzata in molti processi biotecnologici e l'azione della tripsina è nota come tripsinizzazione o tripsina proteolisi. La struttura cristallina di tripsina è mostrata in Figura 1.
Figura 1: tripsina
Il pH ottimale per l'azione di tripsina è 7.6-8.5. Generalmente, il fenolo rosso viene utilizzato nei saggi di tripsina per monitorare l'intervallo di pH sopra indicato. Il fenolo rosso dà un colore rosato a questo intervallo di pH. Le analisi di tripsina vengono effettuate su ghiaccio secco.
Come funziona la tripsina nella coltura cellulare
Le proteine sulla membrana plasmatica sono responsabili di un'ampia varietà di funzioni che sono essenziali per il mantenimento della normale attività fisiologica della cellula. Alcune proteine della membrana plasmatica come le famiglie caderine sono proteine adesive che fungono da ancore, collegando le proteine del citoscheletro alla matrice extracellulare. Questo aiuta l'adesione cellulare e la migrazione cellulare. Le proteine adesive all'interno della membrana plasmatica sono mostrate in figura 2.
Figura 2: Proteine adesive cellulari
Nelle colture cellulari, la tripsina può essere aggiunta al terreno per rilasciare le cellule aderenti dalla superficie del vaso di coltura digerendo le proteine adesive. La tripsina rilascia anche le cellule dagli aggregati attraverso la digestione delle proteine adesive. L'EDTA viene anche aggiunto alle colture cellulari insieme alla tripsina per chelare ioni bivalenti nel terreno. Gli ioni di calcio e magnesio possono inibire l'azione della tripsina. In definitiva, la tripsina aiuta a ottenere singole cellule dalle colture cellulari, facilitando il processo a valle delle cellule.
Conclusione
La tripsina è un enzima fotolitico che digerisce i peptidi. La tripsina è ampiamente utilizzata nella coltura cellulare al fine di ottenere singole cellule come tripsina digerisce le proteine adesive e rilascia le cellule nel mezzo.
Riferimento:
1. "Alterazione del proteoma indotta da tripsina durante la sottocultura cellulare nelle cellule di mammiferi". Journal of Biomedical Science, BioMed Central, 11 maggio 2010, disponibile qui.
Cortesia dell'immagine:
1. "1UTN" Per utente: DrKjaergaard - Opera propria: dal file PDB 1UTN. Creato con PyMol (dominio pubblico) tramite Commons Wikimedia
2. "Adesione cellulare" di ZabMilenko su Wikipedia in inglese - Trasferito da en.wikipedia a Commons da Caos premeditato usando CommonsHelper (dominio pubblico) tramite Commons Wikimedia
