Differenza tra nitrocellulosa e PVDF

Differenza chiave - Nitrocellulosa vs PVDF

Il western blotting è un metodo che consente il rilevamento e la quantificazione di proteine specifiche da un campione di proteine. L'affidabilità della tecnica dipende dalla selezione di una membrana corretta per l'assorbimento delle proteine dal gel. Esistono diversi tipi di membrane microporose. Le membrane di nitrocellulosa e PVDF sono due di queste membrane preferite dai ricercatori a causa delle loro speciali caratteristiche rispetto agli altri tipi di membrane. La selezione tra nitrocellulosa o PVDF è un'altra sfida nel western blotting. Sia la nitrocellulosa che il PVDF hanno un'elevata capacità di assorbimento proteico. La differenza chiave tra nitrocellulosa e membrana PVDF è quella le membrane di nitrocellulosa non hanno la capacità di rimuovere gli anticorpi e riutilizzare la membrana per il reprobo dell'anticorpo mentre le membrane PVDF hanno capacità di rimozione e riutilizzo.

CONTENUTO
1. Panoramica e differenza chiave
2. Cos'è la nitrocellulosa
3. Cos'è il PVDF
4. Confronto affiancato - Nitrocellulosa vs PVDF
5. Sommario

Cos'è la nitrocellulosa?

La nitrocellulosa è un polimero prodotto trattando la cellulosa con acido nitrico e viene utilizzato per produrre membrane microporose in biologia molecolare, in particolare per le tecniche di blotting come il sud, il nord e il western. Le dimensioni dei pori delle membrane di nitrocellulosa variano da 3 a 20 μm. Le membrane microporose di nitrocellulosa facilitano il rilevamento della reazione immunochimica che si verifica sulla superficie della membrana. Pertanto, le membrane di nitrocellulosa sono frequentemente utilizzate per l'immobilizzazione delle proteine e il rilevamento di proteine specifiche nel western blotting. Le membrane di nitrocellulosa possono anche immobilizzare le glicoproteine e gli acidi nucleici.

Le membrane di nitrocellulosa sono preferite nei test di flusso laterale a causa di diverse caratteristiche. Le membrane di nitrocellulosa assorbono proteine ad alta concentrazione. Il solvente utilizzato per bagnare la membrana non diminuisce l'assorbimento proteico della membrana della nitrocellulosa. Le membrane di nitrocellulosa possono essere facilmente tagliate alla dimensione desiderata del gel e trasferire le proteine dal gel alla membrana mediante trasferimento elettrico o capillare. La nitrocellulosa consente un flusso più veloce di proteine attraverso la membrana con un alto potenziale di legame. La nitrocellulosa mostra una maggiore resistenza alla manipolazione. Un altro attributo speciale della membrana di nitrocellulosa è che può essere facilmente incollato con adesivi resistenti all'acqua non solventi su vari supporti di plastica.

Figura 01: membrana nitrocellulosa per western blotting

Cos'è il PVDF?

Il difluoruro di polivinilidene (PVDF) è un fluoropolimero prodotto dalla polimerizzazione del difluoruro di vinilidene e ha un'elevata capacità di immobilizzazione delle proteine. Pertanto, le membrane microporose prodotte da PVDF sono utilizzate nelle tecniche di western blotting per analizzare proteine specifiche dalle miscele di proteine. Le membrane PVDF possono anche essere utilizzate per l'analisi degli amminoacidi e il sequenziamento delle proteine. La caratteristica più importante della membrana PVDF sulla membrana di nitrocellulosa è che può essere facilmente rimosso dagli anticorpi e riutilizzato per le successive sonde anticorpali.

Le membrane PVDF sono più spesse delle membrane di nitrocellulosa; quindi, più resistente ai danni durante il riutilizzo. Le membrane PVDF sono altamente idrofobiche. Pertanto, devono essere immersi in metanolo o isopropanolo prima dell'uso.

Qual è la differenza tra nitrocellulosa e PVDF?

Nitrocellulosa vs PVDF
La nitrocellulosa è un polimero composto da cellulosa.	Il PVDF è un fluoropolimero prodotto dalla polimerizzazione del difluoruro di vinilidene.
Dimensione dei pori della membrana
Le dimensioni tipiche dei pori sono 0,1, 0,2 o 0,45 μ	Le dimensioni tipiche dei pori sono 0,1, 0,2 o 0,45 μm
Capacità di legame proteico
La nitrocellulosa ha una capacità legante le proteine da 80 a 100 μg / cm².	Il PVDF ha una capacità legante delle proteine da 170 a 200 μg / cm².
sensibilità
Questo ha una bassa sensibilità rispetto al PVDF.	Questo ha un'alta sensibilità.
Rilevazione di proteine poco espresse
Poiché la sensibilità è bassa nelle membrane di nitrocellulosa, non è adatta per il rilevamento di proteine poco espresse.	Questo è più adatto per il rilevamento di proteine poco espresse a causa della sua alta sensibilità.
Rumore di sottofondo
Questo ha un rumore di fondo più basso	Questo ha un rumore di fondo maggiore.
Interazioni con proteine
Le molecole proteiche si legano alle membrane di nitrocellulosa attraverso interazioni idrofobiche.	Le proteine si legano alle membrane PVDF attraverso interazioni idrofobiche e dipolari.
Natura della membrana
La nitrocellulosa è fragile e fragile. Tuttavia, sono disponibili versioni di nitrocellulosa e sono resistenti.	Il PVDF è più resistente e ha una maggiore resistenza chimica.
Capacità di strisciare e riutilizzare
La nitrocellulosa può avere difficoltà nello stripping e nel reprobing senza perdere il segnale.	PVDF è ideale per le applicazioni di reprobing e sequencing.
adeguatezza
La nitrocellulosa è ideale per la rilevazione di proteine a basso peso molecolare.	Il PVDF è più adatto per rilevare proteine a più alto peso molecolare.
Altri usi
La nitrocellulosa può essere utilizzata per l'analisi dell'acido nucleico e per il blotting di punti / fessure.	Il PVDF può essere utilizzato per il sequenziamento delle proteine e per i sistemi di saggio in fase solida.
Costo
Questo è più economico delle membrane PVDF.	Questo è più costoso delle membrane di nitrocellulosa.
Necessità di pre-bagnare
Le membrane nitrocellulosiche non richiedono il pre-filtraggio con metanolo	Le membrane PVDF richiedono il pre-filtraggio con metanolo.

Sommario - Nitrocellulosa vs PVDF

Le membrane di nitrocellulosa sono state le prime membrane utilizzate commercialmente per il dosaggio del flusso laterale. Hanno un'alta capacità di assorbimento delle proteine. Pertanto, le membrane di nitrocellulosa sono utilizzate nel western blotting. Il PVDF è un altro tipo di membrana utilizzata nel western blotting e ha anche un'elevata capacità di assorbimento delle proteine. Entrambi i tipi sono utilizzati nel western blotting per l'analisi delle proteine. Tuttavia, le membrane PVDF hanno attributi più speciali, rendendole più adatte delle membrane di nitrocellulosa per il western blotting. Ma le membrane di nitrocellulosa sono più adatte per la rilevazione di proteine a basso peso molecolare, le membrane PVDF sono più adatte per la rilevazione di proteine ad alto peso molecolare. Questa è la differenza tra le membrane di nitrocellulosa e PVDF.

Cortesia dell'immagine:
1. "Western blot transfer" di Bensaccount su Wikipedia in inglese (CC BY 3.0) attraverso Commons Wikimedia

Riferimento:
1.Luque-Garcia, Jose L., Ge Zhou, Tung-Tien Sun e Thomas A. Neubert. "Uso di membrane di nitrocellulosa per la caratterizzazione proteica mediante spettrometria di massa con desorbimento laser / ionizzazione assistita da matrice". Chimica analitica. U.S. National Library of Medicine, 15 luglio 2006. Web. 28 marzo 2017
2. "Marcatori molecolari e biotecnologie vegetali." Google Books. N., n. Web. 28 marzo 2017
3.Maggio, 8 aprile 2013 Tweet. "The Magic's In the Membrane: scegli Saggiamente per i risultati dei Best Western Blot." Biocompare. 8 aprile 2013. Web. 28 marzo 2017

Biologia molecolare