Differenza tra immunofluorescenza e immunoistochimica

Differenza chiave - Immunofluorescenza vs Immunoistochimica
 

La diagnostica della malattia, che utilizza metodi biologici molecolari, è diventata un'area emergente della tecnologia dei laboratori clinici. Comprende tutti i test e i metodi per identificare una malattia e comprendere la causa di una malattia analizzando il DNA, l'RNA o le proteine ​​espresse in un organismo. I rapidi progressi nella diagnostica molecolare hanno consentito la ricerca di base sulle malattie trasmissibili e non trasmissibili. Questi sono usati per determinare i cambiamenti nei livelli di sequenza o espressione in geni o proteine ​​cruciali coinvolti nella malattia. Immunofluorescenza (IF) e Immunohistochemistry (IHC) sono due tecniche così ampiamente utilizzate nella biologia del cancro. IF è un tipo di IHC in cui viene utilizzato un metodo di rilevazione della fluorescenza per analizzare anticorpi monoclonali e policlonali, mentre IHC utilizza metodi basati su sostanze chimiche per rilevare gli anticorpi monoclonali e policlonali. Questa è la differenza chiave tra IF e IHC.

CONTENUTO

1. Panoramica e differenza chiave
2. Cos'è l'immunofluorescenza 
3. Cos'è Immunohistochemistry
4. Somiglianze tra immunofluorescenza e immunoistochimica
5. Confronto affiancato - Immunofluorescenza vs Immunoistochimica in forma tabulare
6. Sommario

Cos'è Immunofluorescenza (IF)?

L'immunofluorescenza è una tecnica di rilevamento in cui gli anticorpi utilizzati nel dosaggio sono etichettati utilizzando coloranti fluorescenti o proteine ​​fluorescenti per il rilevamento. Gli anticorpi secondari marcati possono provocare segnali di fondo indesiderati; pertanto, la tecnica IF si basa sull'etichettatura dell'anticorpo primario allo stato attuale al fine di evitare segnali indesiderati durante il rilevamento. Attraverso questa tecnica, viene impedito il legame non specifico tra l'anticorpo primario e quello secondario, ed è più rapido in quanto non è implicata alcuna fase di incubazione secondaria. Anche la qualità dei dati è migliorata.

Figura 01: colorazione a doppia immunofluorescenza per BrdU, NeuN e GFAP

Fluorocromi o coloranti fluorescenti sono composti che possono assorbire radiazioni, preferibilmente radiazioni ultraviolette che sono eccitate. Quando le particelle raggiungono lo stato fondamentale dallo stato eccitato, emettono radiazioni che vengono catturate e rilevate da un rivelatore per formare uno spettro. È di grande importanza che l'etichetta fluorescente sia compatibile e stabile per la particolare reazione e dovrebbe essere opportunamente coniugata con l'anticorpo per ottenere risultati accurati. Uno dei fluorocromi più utilizzati è l'isotiocianato di fluoresceina (FITC), che è di colore verde, con lunghezze d'onda di picco di assorbimento e di emissione di 490 nm e 520 nm, rispettivamente. La rodamina, un altro agente utilizzato in IF, è di colore rosso e ha distinte lunghezze d'onda di assorbimento e emissione di 553 nm e 627 nm.

Cos'è Immunohistochemistry (IHC)?

L'IHC è un metodo di test molecolare praticato per identificare e confermare la presenza dell'antigene nella cellula bersaglio. La cellula bersaglio potrebbe essere una particella infettiva, un agente patogeno microbico o una cellula tumorale maligna. IHC utilizza anticorpi monoclonali e policlonali per determinare la presenza di antigeni presenti sulla superficie cellulare delle cellule bersaglio. La tecnica è basata sul legame antigene-anticorpo. Un marcatore di rilevamento è coniugato a questi anticorpi per rilevare la presenza o l'assenza dell'antigene specifico. Questi marcatori possono essere marcatori chimici come enzimi, anticorpi marcati con fluorescenza o anticorpi marcati con radio.

Figura 02: fetta del cervello del mouse macchiata da immunoistochimica

L'applicazione più popolare di IHC è nella biologia delle cellule tumorali per identificare la presenza di tumori maligni, ma è anche utilizzata per la rilevazione di malattie infettive.

Quali sono le somiglianze tra immunofluorescenza e immunoistochimica?

• L'immunofluorescenza e l'immunoistochimica avvengono in condizioni in vitro.
• Entrambe le tecniche si basano sull'antigene-antigene
• Entrambe sono tecniche molto rapide.
• I risultati delle tecniche sono riproducibili.
• Entrambi hanno una migliore qualità dei dati.
• Queste tecniche utilizzate nella diagnostica per il cancro e le malattie infettive.

Qual è la differenza tra immunofluorescenza e immunoistochimica?

Immunofluorescenza vs Immunoistochimica
IF è una tecnica di rilevamento in cui gli anticorpi utilizzati nel dosaggio sono etichettati utilizzando coloranti fluorescenti o proteine ​​fluorescenti per il rilevamento.	L'IHC è una tecnica di rilevamento in cui gli anticorpi utilizzati nel dosaggio sono etichettati utilizzando sostanze chimiche o elementi radioattivi per il rilevamento.
Precisione
L'accuratezza è maggiore nella tecnica IF rispetto a IHC.	La precisione è inferiore in IHC.
Specificità
IF è più specifico.	IHC è meno specifico.

Sommario - Immunofluorescenza vs Immunoistochimica

I meccanismi molecolari hanno portato molti cambiamenti nel campo della medicina, dando origine a metodi di sperimentazione molecolare avanzati che hanno portato a rivoluzioni nel campo della diagnostica. Queste invenzioni hanno portato a una rapida e accurata identificazione e conferma della malattia, consentendo in tal modo una somministrazione e una produzione di farmaci efficaci. Queste tecniche sono anche utilizzate in farmacologia per trovare gli obiettivi dei farmaci e per confermare le proprietà farmacocinetiche del farmaco durante il metabolismo del farmaco. IF e IHC sono due metodi diagnostici basati sul concetto di legame dell'antigene e dell'anticorpo, sebbene la modalità di rilevamento in entrambe le tecniche differisca. IF utilizza il principio della fluorescenza per rilevare l'antigene e IHC utilizza il concetto di coniugazione chimica per rilevare l'antigene. Questa è la differenza tra IF e IHC.

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Riferimenti:

1. Aoki, Valéria, et al. "Immunofluorescenza diretta e indiretta." Anais Brasileiros de Dermatologia, SociedadeBrasileira de Dermatologia, Disponibile qui. Accesso effettuato il 25 agosto 2017.
2. Duraiyan, Jeyapradha, et al. "Applicazioni di immunoistochimica". Journal of Pharmacy & Bioallied Sciences, Medknow Publications & Media Pvt Ltd, agosto 2012, Disponibile qui. Accesso effettuato il 25 agosto 2017.

Cortesia dell'immagine:

1. "Doppia colorazione con immunofluorescenza per BrdU, NeuN e GFAP" Di Ma M, Ma Y, Yi X, Guo R, Zhu W, Fan X, Xu G, Frey WH 2 °, Liu X. - Fornitura intranasale di fattore di crescita trasformante- beta1 nei topi dopo l'ictus riduce il volume dell'infarto e aumenta la neurogenesi nella zona subventricolare; PMID 19077183 (CC BY 2.0) attraverso Commons Wikimedia
2. "Ipotalamo di un topo macchiato da ABC-immunoistochimica" Di zabbn - Opera propria (CC BY-SA 3.0) attraverso Commons Wikimedia