Differenza tra PCR e Real-time PCR

PCR vs Real-time PCR

La reazione a catena della PCR o della polimerasi è una scoperta rivoluzionaria nella moderna biologia molecolare, che è stata sviluppata dal chimico Kary Mullis nel 1983. Permette di amplificare una singola sequenza in un complesso DNA per l'analisi. L'idea di base della PCR è che due primer, che sono complementari ai fili opposti di una sequenza di DNA, sono orientati l'uno verso l'altro; i primer producono filamenti complementari, ciascuno contenente l'altro primer. Quindi, il risultato è una grande quantità di una sequenza corrispondente al DNA che si trova tra i due primer. L'enzima DNA polimerasi viene utilizzato per estendere i primer in PCR. La DNA polimerasi è un enzima termostabile e ha la capacità di sopravvivere ad alte temperature (da 94 a 95 ° C) utilizzate per la denaturazione del DNA modello.

La PCR prevede tre passaggi, vale a dire ripetuti cicli di denaturazione, ricottura di primer e sintesi del DNA. Una macchina termociclatrice viene utilizzata per eseguire questa reazione in modo che possa essere programmata per modificare le temperature in modo rapido e preciso. Le applicazioni del PCR sono indagini criminali, impronte digitali del DNA, rilevamento di agenti patogeni e analisi del DNA delle prime specie umane.

Cos'è la PCR convenzionale?

Ci sono tre fasi principali della PCR convenzionale, vale a dire; Stadio di amplificazione del DNA, separazione della PCR e rilevamento dei prodotti. La separazione dei segmenti del DNA avviene tipicamente mediante elettroforesi su gel di agarosio. I prodotti vengono quindi colorati con etheiduim bromuro. Infine, il rilevamento viene ottenuto mediante la visualizzazione di bande su gel sotto luce UV. Pertanto, i risultati finali della PCR convenzionale non sono espressi come numeri. Normalmente la PCR convenzionale è in grado di rilevare un solo parametro.

Cos'è la PCR in tempo reale?

La PCR in tempo reale può rilevare l'amplificazione dei prodotti, in quanto i prodotti sono sintetizzati. Con lo sviluppo della tecnologia, la PCR è diventata una tecnica molto popolare, specialmente per il rilevamento e l'identificazione di batteri negli alimenti. La PCR in tempo reale utilizza un sistema di colorazione fluorescente e un termociclatore dotato di funzionalità di rilevamento fluorescente.

Qual è la differenza tra PCR tradizionale e PCR in tempo reale?

• La PCR convenzionale richiede più tempo poiché utilizza l'elettroforesi su gel per analizzare i prodotti PCR amplificati. Al contrario, la PCR in tempo reale richiede meno tempo in quanto può rilevare amplificazioni durante le prime fasi della reazione.

• La PCR in tempo reale raccoglie i dati nella fase di crescita esponenziale della PCR mentre la PCR tradizionale raccoglie i dati al punto finale della reazione.

• I risultati del punto finale della PCR convenzionale potrebbero non essere molto precisi, ma i risultati della PCR in tempo reale sono molto precisi.

• La PCR in tempo reale è più sensibile della PCR convenzionale.

• La PCR convenzionale ha una risoluzione molto scarsa mentre la PCR in tempo reale può rilevare pochissime modifiche a causa dell'alta risoluzione.

• Il rilevamento del punto finale della PCR convenzionale ha un breve intervallo dinamico mentre la rilevazione PCR in tempo reale ha un ampio intervallo dinamico.

• A differenza della PCR convenzionale, le tecniche di rilevamento automatico si trovano nella PCR in tempo reale.

• La PCR convenzionale è altamente sofisticata e laboriosa più della PCR in tempo reale.

• A differenza della PCR in tempo reale, la PCR convenzionale non può discriminare tra batteri morti e vivi.

• Real-time PCR utilizza un sistema di colorazione fluorescente per rilevare i prodotti mentre la PCR convenzionale utilizza bromuro di etidio e luce UV per visualizzare le bande nel mezzo di gel di agarosio.