Differenza tra il gel impilabile e il gel separatore
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Differenza chiave: impilamento del gel rispetto alla separazione Gel
I termini "stacking gel" e "separating gel" sono usati per spiegare la tecnica SDS-PAGE. L'elettroforesi su gel SDS-PAGE o sodio dodecil solfato-poliacrilammide è una tecnica di laboratorio che viene utilizzata per separare le molecole proteiche in base ai loro pesi molecolari. La teoria alla base della tecnica è che le proteine con differenti pesi molecolari mostrano tassi di migrazione diversi; le molecole a basso peso molecolare migrano più velocemente mentre le molecole ad alto peso molecolare migrano lentamente. Il mezzo per la migrazione è un gel. Esistono due tipi di gel denominati gel impilabile e gel separatore. Il differenza fondamentale tra il gel impilabile e il gel separatore è quello il pH del gel impilabile è 6.8 mentre il pH del gel separatore è 8.8.
CONTENUTO
1. Panoramica e differenza chiave
2. Cosa è il gel impilabile
3. Cos'è il gel separatore
4. Relazione tra il gel impilabile e il gel separatore
5. Confronto affiancato - Gel impilabile vs Gel separatore in forma tabulare
6. Sommario
Cosa è il gel impilabile?
Il gel impilabile è un gel di poliacrilammide a bassa concentrazione che viene posizionato sulla parte superiore del gel risolutivo più concentrato (gel separatore) nella tecnica SDS-PAGE. Il gel impilabile è utilizzato per migliorare la risoluzione dell'elettroforesi. La risoluzione aumenta a causa della differenza tra le concentrazioni di gel di impilamento e gel di risoluzione che influiscono sulle proteine nel campione. Poiché la concentrazione di poliacrilammide nel gel di impilamento è bassa, la dimensione dei pori è più elevata. Questo aiuta anche ad aumentare la separazione.
Il gel impilabile è un gel di poliacrilammide sfuso con pori dilatati di circa il 7% di poliacrilammide. Questi pori non agiscono come una barriera considerevole per le grandi molecole proteiche. Quindi questo gel influenza leggermente la mobilità di quelle proteine. Questo rende la separazione in base alla mobilità e alle dimensioni delle proteine concentrandole tra due gel.
Figura 01: gel di acrilammide SDS-PAGE
Il pH del gel impilabile è 6.8. Il suo pH è acido rispetto a quello di risolvere il gel con 2 unità di pH. Questo pH implica una forza ionica inferiore quindi una maggiore resistenza elettrica. Ciò provoca la mobilità delle proteine rispetto ad altre particelle cariche presenti nel gel.
Cos'è il gel separatore?
Il gel di separazione o gel di risoluzione di un SDS-PAGEtechnique è un gel di poliacrilammide altamente concentrato che viene posto sulla parte superiore del gel impilabile a bassa concentrazione. Il gel separatore contiene una quantità elevata di poliacrilammide (10%). Il pH di questo gel è mantenuto come pH = 8,8, che è un livello di pH più alto di quello del gel impilabile.
Figura 02: Apparecchio per elettroforesi su gel
Quando le molecole proteiche raggiungono il gel separatore, la migrazione di quelle molecole viene rallentata perché il gel separatore è un gel ad alta concentrazione con una dimensione dei pori ridotta che può fungere da barriera considerevole per il movimento delle molecole proteiche. Questo rallentamento consente alle altre proteine di migrare lentamente per raggiungere il risultato, creando una banda stretta e concentrata tra i due gel.
Qual è la relazione tra il gel impilabile e il gel separatore?
- Entrambi i tipi di gel impilabile e gel separatore sono utilizzati nello stesso apparecchio.
Qual è la differenza tra il gel impilabile e il gel separatore?
Gel impilabile vs Gel separatore | |
| Il gel impilabile è un gel di poliacrilammide a bassa concentrazione che viene posizionato sulla parte superiore del gel risolutivo più concentrato (gel separatore) nella tecnica SDS-PAGE. | Il gel di separazione o gel di risoluzione di una tecnica SDS-PAGE è un gel di poliacrilammide altamente concentrato che viene posto sulla sommità di un gel impilabile a bassa concentrazione. |
| Posizionamento | |
| Il gel impilabile viene posto sul gel (separatore) risolvente. | Il gel separatore è posto sul fondo del contenitore utilizzato per l'elettroforesi su gel. |
| Concentrazione | |
| La concentrazione del gel impilabile è alta. | La concentrazione del gel separatore è bassa. |
| Contenuto di poliacrilammide | |
| Il gel impilabile contiene circa il 7% di poliacrilammide. | Il gel separatore contiene circa il 10% di poliacrilammide. |
| pH | |
| Il pH del gel impilabile è 6.8. | Il pH del gel separatore è 8.8. |
| Dimensione dei pori | |
| Grandi dimensioni dei pori sono presenti nel gel impilabile. | Piccole dimensioni dei pori sono presenti nel gel separatore. |
| Risoluzione | |
| Il gel impilabile offre una migliore risoluzione. | Il gel separatore fornisce una risoluzione scadente. |
Sommario - Gel impilabile vs Separazione Gel
Gel impilabile e gel separatore sono due tipi di gel di poliacrilammide usati per ottenere una migliore separazione delle molecole proteiche in un dato campione. La differenza tra il gel impilabile e il gel separatore è che il pH del gel impilabile è 6.8 mentre il pH del gel separatore è 8.8.
Riferimento:
1. "Elettroforesi su gel di poliacrilammide" Elettroforesi su gel di poliacrilammide (teoria): Biologia molecolare Laboratorio virtuale II: biotecnologia e ingegneria biomedica: Amrita Vishwa Vidyapeetham Virtual Lab. Disponibile qui
2. "Come funziona SDS-PAGE." Bitesize Bio, 16 febbraio 2018. Disponibile qui
3. "SDS-PAGE stacking gel - BICH 608 (Polymenis-Pettigrew)." Google Sites. Disponibile qui
Cortesia dell'immagine:
1.'SDS-PAGE Acrylamide gel'By Bensaccount di Wikipedia in inglese, (CC BY 3.0) attraverso Commons Wikimedia
2. «Apparecchio per elettroforesi» Di Jeffrey M. Vinocur - Opera propria, (CC-BY 2.5) attraverso Commons Wikimedia
