Differenza tra carta sottile strato e colonna cromatografia
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Differenza chiave - Carta vs strato sottile vs Colonna cromatografia
Cromatografia su carta, cromatografia su strato sottile e cromatografia su colonna sono tre tipi di tecniche cromatografiche. Il differenza fondamentale tra la cromatografia su carta, la cromatografia su strato sottile e la cromatografia su colonna si basano sul tipo di fase stazionaria utilizzata nella tecnica della cromatografia. La cromatografia su carta utilizza una carta di cellulosa come fase stazionaria, la cromatografia su strato sottile utilizza l'allumina o il gel di silice come fase stazionaria, mentre la cromatografia su colonna utilizza una colonna imballata con un materiale a matrice adatto come fase stazionaria.
Nel processo di separazione e identificazione di biomolecole come proteine e carboidrati, la cromatografia è un'importante tecnica biofisica utilizzata. La cromatografia separa i composti in base alla loro solubilità, dimensione e carica. Sulla base del meccanismo di separazione, la cromatografia utilizza meccanismi come lo scambio ionico, l'assorbimento, la separazione e l'esclusione dimensionale e ci sono tre tecniche cromatografiche; vale a dire, carta, strato sottile e cromatografia su colonna. La cromatografia su carta si basa sull'adsorbimento e sulla solubilità solido-liquido del composto e utilizza una carta di cellulosa come fase stazionaria. La cromatografia su strato sottile si basa sull'adsorbimento di molecole solido-liquido. Ha una fase stazionaria tipicamente fatta di allumina o gel di silice e la fase mobile che è il solvente. La cromatografia su colonna utilizza una colonna imballata con una matrice che viene utilizzata per separare le molecole principalmente in base alla loro dimensione, affinità o sua carica.
CONTENUTO
1. Panoramica di cromatografia e differenza chiave
2. Cos'è la cromatografia su carta
3. Cos'è la cromatografia su strato sottile
4. Cos'è la cromatografia su colonna
5. Somiglianze tra cromatografia su carta, strato sottile e colonna
6. Confronto affiancato - Carta vs strato sottile vs cromatografia su colonna in forma tabulare
7. Sommario
Cos'è la cromatografia su carta?
La cromatografia su carta è il tipo più semplice di cromatografia utilizzata e non è utilizzata per ricerche estensive. Viene utilizzato principalmente nei laboratori degli studenti per identificare biomolecole come aminoacidi e carboidrati presenti nelle miscele. La cromatografia su carta utilizza una fase stazionaria che viene prodotta utilizzando carta di cellulosa o carta da filtro Whatman e una fase mobile che viene solitamente preparata utilizzando solventi organici come n-butanolo, ecc. La fase stazionaria è satura di acqua, rendendo liquido la fase stazionaria. Pertanto, quando i composti vengono individuati e lasciati correre in presenza della fase mobile, a seconda della solubilità dei composti, vengono separati. Pertanto, sullo sviluppo del cromatogramma, è possibile eseguire la colorazione per determinare la corsa della lunghezza di ciascun composto. Il fattore di ritenzione può quindi essere calcolato.
Figura 01: cromatografia su carta
La cromatografia su carta può essere ulteriormente classificata come cromatografia su carta crescente e cromatografia su carta discendente a seconda della direzione del solvente in funzione.
Cos'è la cromatografia su strato sottile?
Cromatografia su strato sottile o TLC è una tecnica comunemente usata per identificare diversi aminoacidi presenti in una miscela o per l'identificazione di proteine. La tecnica di separazione si basa sull'adsorbimento solido-liquido. Durante la cromatografia su strato sottile, come fase stazionaria viene utilizzata una piastra in allumina o gel di silice. La miscela di solventi varia in base al fabbisogno e può utilizzare diverse combinazioni di composti organici come n-butanolo, acido acetico e acqua per preparare il solvente. I composti da separare vengono individuati sulla piastra e immersi nella miscela di solventi. Una volta che il solvente si solleva in base all'azione capillare data dalla piastra, i composti individuati sulla piastra si muovono anche in base alla loro solubilità nel solvente.
Figura 02: cromatografia su strato sottile
Il rilevamento delle macchie dopo il cromatogramma viene eseguito da diverse procedure di colorazione. Alcuni usano la colorazione di ninidrina che è un metodo abbastanza tossico di colorazione. I moderni cromatogrammi su strato sottile utilizzano tecniche di fluorescenza per visualizzare il cromatogramma dopo la corsa. A seconda delle distanze percorse, è possibile calcolare il tempo di ritenzione di ciascun composto. Questo può essere usato per identificare il tipo di composto separato in base alla miscela utilizzata. La TLC viene utilizzata principalmente per identificare gli amminoacidi in una miscela di proteine e anche per separare diversi tipi di monosaccaridi presenti in una miscela.
Cos'è la cromatografia su colonna?
La cromatografia su colonna è un termine generico usato per descrivere molti tipi di tecniche cromatografiche che utilizzano il metodo di separazione basato su colonne. Nella cromatografia su colonna, una colonna fisica viene utilizzata con un materiale di imballaggio per separare i composti. La separazione può essere basata su diverse proprietà fisiche esibite dai composti. Queste proprietà possono essere la carica, le dimensioni, la conformazione 3D e la capacità di legatura, ecc. Quindi, la colonna imballata con il materiale della matrice agisce come la fase stazionaria e il buffer di lavaggio applicato alla colonna agisce come la fase mobile.
Se le molecole vengono separate in base alle dimensioni, il materiale di imballaggio viene imballato in modo tale da lasciare i pori attraverso cui i composti possono viaggiare. Quindi, le molecole più grandi che non possono scorrere attraverso i pori vengono eluite per prime, mentre le molecole più piccole impiegano molto più tempo per eluire.
Figura 03: cromatografia su colonna
Se le molecole sono separate in base alla loro carica, la fase stazionaria conterrà uno scambiatore di anioni o cationici a cui i composti saranno attratti in base alla loro carica. Pertanto durante la fase di lavaggio, i composti non legati saranno eluiti. Dopo aver aggiunto il tampone di eluizione, i composti carichi legati saranno eluiti. La rilevazione di questi eluenti si basa principalmente su tecniche spettrofotometriche.
Quali sono le somiglianze tra cromatografia su carta a strato sottile e colonna?
- Tutte le tecniche di cromatografia su strato sottile e colonna sono utilizzate per la separazione di biomolecole quali aminoacidi, proteine e carboidrati.
- Le tecniche di cromatografia su strato sottile e colonna hanno una fase mobile e una fase stazionaria.
- Le tecniche di cromatografia su strato sottile e colonna utilizzano meccanismi biofisici per la separazione.
Qual è la differenza tra carta strato sottile e cromatografia su colonna?
Carta vs Thin Layer vs Column Chromatography | |
| Cromatografia su carta | La cromatografia su carta è una tecnica cromatografica utilizzata per separare i composti in base all'assorbimento liquido-liquido e alla solubilità del composto. Utilizza una carta di cellulosa come fase stazionaria. |
| Cromatografia su strato sottile | La cromatografia su strato sottile è un'altra tecnica cromatografica basata sull'adsorbimento di molecole solido-liquido. Ha una fase stazionaria fatta di allumina o gel di silice e un solvente come fase mobile, che è il solvente. |
| Cromatografia a colonna | La cromatografia su colonna utilizza una colonna imballata con una matrice che viene utilizzata per separare le molecole principalmente in base alla loro dimensione, affinità o sua carica. |
| Fase stazionaria | |
| Cromatografia su carta | La carta in nitrocellulosa di Whatman viene utilizzata come fase stazionaria nella cromatografia su carta. |
| Cromatografia su strato sottile | Il gel di allumina o di silice viene utilizzato come fase stazionaria della cromatografia su strato sottile. |
| Cromatografia a colonna | Una colonna imballata con materiale di imballaggio adatto viene utilizzata come fase stazionaria nella cromatografia su colonna. |
| Fase mobile | |
| Cromatografia su carta | Il solvente in funzione è la fase mobile della cromatografia su carta. |
| Cromatografia su strato sottile | Il solvente corrente è la fase mobile della cromatografia su strato sottile. |
| Cromatografia a colonna | Il tampone di lavaggio è la fase mobile della cromatografia su colonna. |
| Meccanismi usati per la separazione | |
| Cromatografia su carta | La cromatografia su carta si basa sull'assorbimento solido-liquido. |
| Cromatografia su strato sottile | La cromatografia su strato sottile si basa sull'assorbimento solido-liquido. |
| Cromatografia a colonna | La cromatografia su colonna si basa sull'esclusione, sulla carica e sulla forma delle dimensioni. |
| Tampone di eluizione | |
| Cromatografia su carta | Non richiesto dalla cromatografia su carta. |
| Cromatografia su strato sottile | Non richiesto per cromatografia su strato sottile. |
| Cromatografia a colonna | Richiesto in cromatografia su colonna. |
| rivelazione | |
| Cromatografia su carta | Colorazione e determinazione del fattore di ritenzione. |
| Cromatografia su strato sottile | Colorazione e determinazione del fattore di ritenzione. |
| Cromatografia a colonna | Determinazione spettrofotometrica. |
Sommario - Carta sottile strato vs Colonna cromatografia
La cromatografia su carta, la TLC e la cromatografia su colonna sono tecniche di separazione utilizzate per separare le biomolecole come proteine, amminoacidi e carboidrati (principalmente monosaccaridi). La cromatografia su carta utilizza una carta di cellulosa come fase stazionaria e il meccanismo di separazione si basa sull'adsorbimento solido-liquido. TLC utilizza anche meccanismi di adsorbimento solido-liquido. Le molecole sono separate sulla fase stazionaria, a seconda della loro solubilità nella fase mobile. La cromatografia su colonna utilizza proprietà fisiche come dimensione, forma, carica e peso molecolare del composto da separare. La colonna imballata con il materiale matrice funge da fase stazionaria, mentre il tampone di lavaggio funge da fase solvente. Questa è la differenza tra uno strato sottile di carta e la cromatografia su colonna.
Riferimento:
1. Clark, Jim. "THIN LAYER CHROMATOGRAPHY." Thin Layer Chromatography, 2007. Disponibile qui
2.Coskun, Ozlem. "Tecniche di separazione: cromatografia". Cliniche del nord di Istanbul, Kare Publishing, 2016. Disponibile qui
Cortesia dell'immagine:
1. "Serbatoio per cromatografia" (CC BY-SA 3.0) attraverso Commons Wikimedia
2.'Tlc sequence'By Quantockgoblin, (Public Domain) via Commons Wikimedia
3. "Colonna cromatografia" (dominio pubblico) via Commons Wikimedia
