Un processo di colorazione differenziale viene utilizzato nella colorazione delle endospore. Il verde malachite è la principale macchia che macchia sia le cellule vegetali che le endospore all'interno del campione. Quindi, l'uso del calore aiuta a penetrare la macchia primaria fino all'endosporo. Dopo la decolorazione, il colorante di contrasto viene utilizzato per colorare lo sfondo.
Due generi patogeni conosciuti come Bacillo e Clostridium produrre endospore metabolicamente inattive per resistere alle condizioni ambientali avverse. Poiché le endospore causano numerose malattie letali, l'identificazione di queste è piuttosto importante nei campioni clinici.
1. Cosa sono le endospore
- Definizione, fatti
2. Che cos'è Endospore Staining
- Tecniche di Endospora Staining
3. Perché il calore è utilizzato nella colorazione endospora
- Uso di calore
Termini chiave: endospore, calore, verde malachite, pori, cellule vegetali
Un endospora è una struttura resistente prodotta da alcuni generi batterici patogeni come Bacillo e Clostridium per sopravvivere in condizioni ambientali sfavorevoli. Queste condizioni sfavorevoli possono essere calore, essiccazione, radiazioni o sostanze chimiche. Il processo di produzione di endospore da cellule vegetative è chiamato sporulazione. Potrebbero essere necessarie 8-10 ore per completare il processo. Le endospore possono risiedere all'interno della cellula batterica o possono esistere come spore libere. La formazione di endospora è mostrata in Figura 1.
Figura 1: Formazione endospora
Le endospore sono metabolicamente inattive o dormienti. Contengono una piccola quantità di citoplasma e DNA coperti da una copertura esterna protettiva. La parete cellulare è costituita da acido dipicolinico, che conferisce proprietà termoresistenti all'endosporo. Le endospore germinano per produrre nuovi organismi quando le condizioni ambientali diventano favorevoli. Il trattamento del calore umido a 121 ° C per 15 minuti può distruggere le endospore batteriche.
La colorazione endospora è un processo differenziale di colorazione in cui diverse strutture del campione sono colorate in diversi colori. Permette l'identificazione di endospore da cellule vegetative. Il processo di colorazione endospora standard è la tecnica di Schaeffer-Dulton. La macchia primaria in questa tecnica è verde malachite e la colorazione di contrasto è safranina.
1. Dopo aver spalmato su un vetrino da microscopio, consentire al campione batterico di saturarsi con la soluzione di verde malachite.
2. Quindi, riscaldare delicatamente il vetrino per 3-5 minuti fino a quando il colorante inizia ad evaporare.
3. Lasciare raffreddare il vetrino e lavarlo con acqua per la decolorazione.
4. Infine, dopo la controcolorazione, sciacquare il vetrino.
5. Asciugare all'aria il vetrino e osservarlo al microscopio.
Qui, le endospore sono colorate in verde con verde malachite e le cellule vegetative sono colorate in rosa con safranina. Le endospore macchiate dalla tecnica di Schaeffer-Dulton sono mostrate in figura 2.
Figura 2: Endospore (verde) e cellule Vegative (rosa)
Una tecnica alternativa di colorazione endospora può essere identificata come metodo di Doner. Le endospore saranno colorate in rosso con questo metodo.
La copertura cheratinica delle endospore resiste alla colorazione. Pertanto, la macchia primaria deve essere forzata nell'endospora. L'uso del calore migliora la penetrazione della macchia primaria nell'endosporo. Il vetrino con verde malachite può essere riscaldato fino a 3-5 minuti. Il tempo di riscaldamento è direttamente proporzionale alla quantità di coloranti penetrati nel muro delle endospore. Tempi di riscaldamento più lunghi fanno pori sulla parete dell'endospora, facilitando la penetrazione di più coloranti.
Le endospore sono le cellule riproduttive della maggior parte dei batteri patogeni. Pertanto, l'identificazione delle endospore in un campione è fondamentale nella diagnostica.
1. "Macchia di endospora: definizioni, tecniche e procedure". MicroscopeMaster, Disponibile qui.
1. "Formazione endospora" di Farah, Sophia, Alex - Opera propria (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia
2. "Bacillus subtilis Spore" di Y tambe (caricatore originale) - Opera propria (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia