Qual è la differenza tra plasmidi a singola digeribilità e plasmidi a doppia digeribilità

Il differenza principale tra plasmide a digerito singolo e plasmide a doppia digeribilità gli enzimi di restrizione singola determinano un singolo plasmide digerito mentre due diversi tipi di enzimi di restrizione determinano un doppio plasmide digerito. Inoltre, l'inserimento del frammento di DNA estraneo può avvenire in entrambi gli orientamenti con plasmidi a digerito singolo mentre l'inserimento del frammento di DNA estraneo si verifica solo nell'orientamento corretto con plasmidi a doppia digeribilità.

Il plasmide a digerito singolo e il plasmide a doppia digeribilità sono due tipi di plasmidi utilizzati nella tecnologia del DNA ricombinante per produrre DNA ricombinante.

Aree chiave coperte

1. Cos'è un plasmide digerito singolo
     - Definizione, auto-ligazione, orientamento
2. Cos'è un plasmide a doppia digerita
     - Definizione, doppia digestione, orientamento
3. Quali sono le somiglianze tra plasmidi a singola digeribilità e plasmidi a doppia digeribilità
     - Profilo delle caratteristiche comuni
4. Qual è la differenza tra plasmidi a singola digeribilità e plasmidi a doppia digeribilità
     - Confronto tra le principali differenze

Parole chiave

Plasmide doppiamente digerito, doppia digestione, orientamento, plasmide ricombinante, plasmide digerito singolo, singola digestione

Cos'è un plasmide digerito singolo

I plasmidi a digerito singolo sono un tipo di plasmidi digeriti solo con un singolo enzima di restrizione. Quindi, questo processo è chiamato digestione singola. In generale, i plasmidi utilizzati nella tecnologia del DNA ricombinante contengono solo un singolo sito di restrizione per un particolare enzima di restrizione. Pertanto, la digestione singola rende il plasmide circolare lineare, producendo un singolo frammento di DNA. Le due estremità di questo frammento di DNA sono compatibili tra loro; pertanto, possono subire l'auto-legatura durante la successiva legatura con l'inserto. 

Figura 1: Plasmide digerito singolo

Qui, l'inserto deve anche essere digerito con lo stesso enzima di restrizione per produrre estremità compatibili con il plasmide. Pertanto, la legatura avviene in due possibili orientamenti: nell'orientamento da 5 'a 3' e nell'orientamento da 3 'a 5'. Tuttavia, gli inserti con lo stesso orientamento della regione del promotore possono essere sottoposti a trascrizione. Pertanto, questo orientamento è noto come orientamento corretto. Prima di procedere, i plasmidi ricombinanti con l'orientamento corretto devono essere selezionati mediante screening delle colonie trasformate, mediante PCR o test biochimici.

Cos'è un plasmide a doppia digerita

I plasmidi a doppia digeribilità sono i plasmidi che subiscono una doppia digestione con due enzimi di restrizione. Qui, questa reazione può essere eseguita in un unico tubo. I siti di restrizione per entrambe le digestioni si verificano all'interno del sito di riconoscimento delle restrizioni nel plasmide. Quindi, la reazione a doppia digestione risulta anche in un singolo frammento di DNA. Ma ciascuna delle due estremità è prodotta da un enzima di restrizione diverso. Pertanto, questi fini non sono compatibili tra loro e non subiscono l'auto-ligazione.

Figura 2: Plasmide a doppia digeribilità

Ancora più importante, l'inserto può essere ligato nell'orientamento corretto con plasmidi a doppia digeribilità, digerendo le estremità dell'inserto in ligare con l'orientamento corretto. Pertanto, i plasmidi a doppia digeribilità producono solo i plasmidi ricombinanti con un orientamento corretto, il che rende superflua la successiva selezione dell'orientamento. Ciò consente di risparmiare tempo poiché riduce un passaggio completo dalla procedura di produzione del DNA ricombinante.

Somiglianze tra plasmidi a singola digestione e plasmidi a doppia digeribilità

• Il plasmide a digerito singolo e il plasmide a doppia digeribilità sono due tipi di plasmidi utilizzati nella tecnologia del DNA ricombinante.
• Sia la digestione singola che la doppia digestione possono essere eseguite con una singola reazione.
• Inoltre, in entrambi i casi, il frammento di DNA estraneo viene inserito tra le due estremità dei plasmidi digeriti.
• Inoltre, sia la singola che la doppia digestione di un plasmide producono un singolo frammento di DNA mentre due frammenti di DNA si verificano quando viene digerito un plasmide ricombinante.

Differenza tra plasmidi a singola digeribilità e plasmidi a doppia digeribilità

Definizione

Il plasmide a digerito singolo si riferisce a un plasmide digerito da un singolo enzima di restrizione mentre il plasmide a doppia digerita si riferisce a un plasmide digerito da due diversi enzimi di restrizione. Queste definizioni spiegano la differenza principale tra il plasmide a digerito singolo e il plasmide a doppia digeribilità.

Ends

Nei plasmidi a digerito singolo, la digestione con lo stesso enzima di restrizione produce entrambe le estremità mentre, in plasmidi a doppia digeribilità, la digestione con un enzima di restrizione diverso produce ciascuna estremità. Quindi, questa è una importante differenza principale tra il plasmide a digerito singolo e il plasmide a doppia digeribilità.

Auto-legatura

Inoltre, l'auto-ligazione è una delle principali differenze principali tra il plasmide a digerito singolo e il plasmide a doppia digeribilità. Le estremità dei plasmidi a digerito singolo sono compatibili l'una con l'altra per l'auto-ligazione mentre le estremità dei plasmidi a doppia digeribilità non sono compatibili l'una con l'altra per l'auto-ligazione.

Importanza

Inoltre, l'inserimento di un frammento di DNA estraneo può avvenire in entrambi gli orientamenti nei plasmidi a digitazione singola, mentre l'inserimento di frammenti di DNA estraneo può essere fatto nell'orientamento corretto nei plasmidi a doppia digeribilità.

Tipi di plasmidi ricombinanti

Un plasmide a digerito singolo può produrre tre tipi di plasmidi: due plasmidi ricombinanti con orientamenti opposti e un plasmide auto-ligato senza un inserto. Nel frattempo, un plasmide a doppia digeribilità può produrre solo un tipo di plasmide ricombinante, che è nell'orientamento corretto. Quindi, questa è un'altra differenza principale tra plasmide a digerito singolo e plasmide a doppia digeribilità. 

Che fa risparmiare tempo

I frammenti ricombinanti di plasmidi a digerito singolo devono essere selezionati per il loro corretto orientamento mentre i plasmidi a doppia digeribilità assicurano il corretto orientamento del frammento di DNA estraneo. Pertanto, i plasmidi a doppia digeribilità risparmiano tempo nelle tecniche del DNA ricombinante, non nei plasmidi a digerito singolo.

Conclusione

I plasmidi a digerito singolo vengono digeriti con un singolo enzima di restrizione, il che si traduce in fini compatibili con l'auto-ligazione. Inoltre, la loro legatura con il frammento di DNA estraneo può verificarsi in entrambi gli orientamenti. Pertanto, devono essere selezionati i plasmidi ricombinanti con l'orientamento corretto. D'altra parte, i plasmidi a doppia digeribilità vengono digeriti con due diversi enzimi di restrizione. Pertanto, le due estremità non sono compatibili per l'auto-ligazione. Inoltre, il frammento di DNA estraneo può essere ligato nel corretto orientamento con plasmidi a doppia digeribilità. Pertanto, la principale differenza tra il plasmide a digerito singolo e il plasmide a doppia digeribilità è il tipo di digestione e l'orientamento dell'inserto.

Riferimento:

1. Griffiths AJF, Miller JH, Suzuki DT, et al. Un'introduzione all'analisi genetica. 7a edizione. New York: W. H. Freeman; 2000. Rendere il DNA ricombinante. Disponibile qui