Qual è la differenza tra ELISA diretto e indiretto

Il differenza principale tra ELISA diretto e indiretto è quello nell'ELISA diretto, l'anticorpo primario è direttamente coniugato all'enzima di rilevazione mentre, nell'ELISA indiretto, un anticorpo secondario che è complementare all'anticorpo primario è coniugato con l'enzima di rilevazione. Ciò significa che l'ELISA diretto utilizza un singolo anticorpo mentre l'ELISA indiretto utilizza due anticorpi.

ELISA diretto e indiretto sono due metodi di ELISA (saggio immunoassorbente legato all'enzima) utilizzato per rilevare la presenza di un antigene o anticorpo specifico nel mezzo.

Aree chiave coperte

1. Cos'è Direct ELISA
     - Definizione, procedura, caratteristiche
2. Cos'è l'ELISA indiretto
     - Definizione, procedura, caratteristiche
3. Quali sono le somiglianze tra ELISA diretto e indiretto
     - Profilo delle caratteristiche comuni
4. Qual è la differenza tra ELISA diretto e indiretto
     - Confronto tra le principali differenze

Parole chiave

ELISA diretta, Enzima di rilevamento, ELISA indiretto, Anticorpo primario, Anticorpo secondario, Substrato

Cos'è Direct ELISA

L'ELISA diretto è un metodo ELISA che consente il rilevamento dell'antigene con un anticorpo primario legato all'enzima stesso. Questo metodo ELISA è stato sviluppato per la prima volta da Perlmann e Engvall. È considerata la forma più semplice di ELISA. I passaggi di ELISA diretto sono elencati di seguito:

1. Rivestire la superficie della piastra con il campione;
2. Incubazione della piastra con l'anticorpo primario coniugato con l'enzima;
3. Lavaggio per la rimozione di anticorpi non legati dalla piastra;
4. Aggiunta del substrato richiesto dalla reazione enzimatica;
5. Rilevazione dei segnali prodotti dalla piastra.

Qui, i due principali tipi di enzimi coniugati con l'anticorpo primario sono HRP (perossidasi di rafano) e fosfatasi alcalina. I tre tipi di substrati utilizzati insieme all'HRP sono OPD (o-fenilendiammina dicloridrato), TMB (3, 3 ', 5, 5'-tetrametilbenzidina) e ABTS (2, 2'-Azinobis [3-etilbenzotiazolina-6- acido solfonico] -diammonio). Il substrato usato insieme alla fosfatasi alcalina è il PNPP (p-nitrofenil fosfato, sale disodico). La reazione enzimatica sul substrato provoca un cambiamento di colore nel mezzo, che dipende dal tipo di substrato e dall'enzima utilizzato per la reazione. Ciò facilita il rilevamento di campioni con l'antigene bersaglio. 

Figura 1: ELISA diretto

L'ELISA diretto è più adatto per il rilevamento della quantità di antigene ad alto peso molecolare in un campione. Il minor numero di passaggi in questo metodo ELISA rende un dosaggio più veloce. Tuttavia, a causa del costo e del tempo incorporati nell'etichettatura dell'anticorpo primario con enzimi, l'uso dell'ELISA diretto è piuttosto raro. D'altra parte, produce effetti negativi anche sull'antigene bersaglio.

Cos'è l'ELISA indiretto

L'ELISA indiretto è un altro metodo di ELISA che utilizza due anticorpi per la rilevazione: anticorpi primari e secondari. I passaggi del test ELISA indiretto sono i seguenti:

1. Rivestire la superficie della piastra con il campione;
2. Incubazione della piastra con l'anticorpo primario;
3. Lavaggio per rimuovere gli anticorpi non legati dalla piastra;
4. Incubazione della piastra con l'anticorpo secondario coniugato con l'enzima di rilevazione;
5. Lavaggio per rimuovere gli anticorpi non legati dalla piastra;
6. Aggiunta del substrato richiesto dalla reazione enzimatica;
7. Rilevazione dei segnali prodotti dalla piastra.

   Figura 2: ELISA indiretto

L'ELISA indiretto procede attraverso due passaggi che legano gli anticorpi. D'altra parte, l'anticorpo secondario è coniugato con l'enzima di rilevazione. In generale, ci sono molti anticorpi secondari coniugati con enzimi. Qui, l'anticorpo secondario è principalmente un anticorpo policlonale anti-specie. A causa della disponibilità di anticorpi coniugati con enzimi, il metodo ELISA indiretto è più spesso utilizzato nei saggi immunologici per la rilevazione di parassiti, batteri e virus. D'altra parte, diversi anticorpi secondari possono essere legati all'anticorpo primario nella piastra. Pertanto, la sensibilità del dosaggio è molto alta.

Somiglianze tra ELISA diretto e indiretto

• ELISA diretto e indiretto sono due metodi di ELISA in cui l'antigene di interesse è direttamente collegato alla piastra.
• Entrambi i metodi riguardano la rilevazione della presenza di una specifica molecola proteica in un campione. Questa molecola proteica è direttamente collegata alla piastra.
• Piastre a 96 pozzetti o provette a 8 pozzetti vengono utilizzate in entrambi i metodi. Entrambi questi piatti e tubi sono fatti di polistirene. Le piastre a 96 pozzetti offrono molti spazi per la determinazione della diluizione ottimale per la reazione. Nel frattempo, i tubi a strip da 8 pozzetti sono migliori per i saggi finemente sintonizzati.

Differenza tra ELISA diretto e indiretto

Definizione

Elisa diretta si riferisce a un tipo di ELISA in cui l'anticorpo primario è coniugato con l'enzima di rilevazione mentre l'ELISA indiretto si riferisce a un tipo di ELISA in cui l'anticorpo secondario è coniugato con l'enzima di rilevazione.

Numero di anticorpi utilizzati

L'ELISA diretto utilizza un anticorpo, che è l'anticorpo primario mentre l'ELISA indiretto utilizza due anticorpi, l'anticorpo primario e secondario. Questa è la principale differenza tra ELISA diretto e indiretto.

L'enzima di rilevamento è collegato a

Inoltre, l'enzima di rilevazione è legato all'anticorpo primario nell'ELISA diretto mentre l'enzima di rilevazione è collegato all'anticorpo secondario nell'ELISA indiretto.

Intensità dei segnali

Un'altra differenza tra ELISA diretto e indiretto è che i segnali prodotti dall'ELISA diretto sono meno intensi mentre i segnali prodotti da ELISA indiretto sono più intensi a causa dell'amplificazione del segnale.

Segnali di fondo

Tuttavia, l'ELISA diretto produce più segnali di fondo rispetto all'ELISA indiretto.

sensibilità

L'ELISA diretto è meno sensibile mentre l'ELISA indiretto è più sensibile. Questa è anche una differenza tra ELISA diretto e indiretto. 

Cross-Reattività

Ancora un'altra differenza tra ELISA diretto e indiretto è la cross-reattività. Cioè, la reattività crociata è minima in ELISA diretto mentre è significativa nell'ELISA indiretto.

Tempo

Inoltre, l'ELISA diretto richiede meno tempo a causa di un minor numero di passaggi mentre l'ELISA indiretto richiede più tempo a causa del raddoppio delle fasi di associazione degli anticorpi.

Frequenza d'uso

Sebbene l'ELISA diretto sia relativamente raro, l'ELISA indiretto è più comune.

Conclusione

L'ELISA diretto utilizza solo l'anticorpo primario per la rilevazione di un antigene specifico. Ciò significa che l'anticorpo primario è coniugato con l'enzima di rilevazione nell'ELISA diretto. Tuttavia, l'ELISA indiretto utilizza un anticorpo primario per legarsi con l'antigene mentre l'anticorpo secondario coniugato con l'enzima si lega all'anticorpo primario. L'ELISA diretto è meno comune a causa della minore disponibilità di anticorpi primari coniugati con l'enzima. La principale differenza tra ELISA diretto e indiretto è il numero di anticorpi utilizzati.

Riferimento:

1. "Tipi di ELISA." Bio-Rad, Bio-Rad Laboratories, disponibile qui

Cortesia dell'immagine:

1. "Diagramma ELISA" di Cavitri - Opera personale (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia  
2. "ELISA indiretta" di Cawang - Opera propria (CC0) tramite Commons Wikimedia