Differenza tra fase inversa e cromatografia di interazione idrofobica
Share
Il differenza principale tra la fase inversa e la cromatografia di interazione idrofobica è che il cromatografia in fase inversa (RPC) utilizza un mezzo più idrofobo, che porta a interazioni più forti mentre la cromatografia di interazione idrofobica (HIC) utilizza un mezzo meno idrofobo rispetto al mezzo nella cromatografia in fase inversa.
Cromatografia in fase inversa e cromatografia di interazione idrofobica sono due tecniche cromatografiche che dipendono dalle interazioni tra superfici idrofobe di un mezzo di cromatografia e le zone idrofobiche sulla superficie delle biomolecole.
Aree chiave coperte
1. Cos'è la cromatografia a fase inversa
- Definizione, passaggi, applicazioni
2. Cos'è la cromatografia di interazione idrofobica
- Definizione, passaggi, applicazioni
3. Quali sono le somiglianze tra cromatografia a fase inversa e cromatografia di interazione idrofobica
- Profilo delle caratteristiche comuni
4. Qual è la differenza tra cromatografia a fase inversa e cromatografia di interazione idrofobica
- Confronto tra le principali differenze
Parole chiave
Cromatografia di interazione idrofobica, HIC, media, cromatografia a fase inversa, RPC
Cos'è la cromatografia a fase inversa
La cromatografia a fase inversa (RPC) è una tecnica cromatografica utilizzata nella purificazione e analisi di biomolecole quali proteine, peptidi e oligonucleotidi. Fornisce una separazione ad alta risoluzione ed è ideale per la mappatura dei peptidi e il controllo della purezza. L'RPC è più spesso usato nella lucidatura finale di peptidi e oligonucleotidi.
Come fase stazionaria possono essere usati due tipi principali di mezzi idrofobi: perle di silice ricoperte da catene di carbonio o nanopolimeri idrofobi. Una colonna viene imballata con il mezzo idrofobo in una forma di letto impaccato su cui viene applicato il campione. Un agente di accoppiamento ionico come l'acido trifluoroacetico (TFA) può essere aggiunto alla fase mobile per migliorare la formazione di interazioni idrofobiche. Un modificatore organico come il 5% di acetonitrile è usato all'inizio e l'eluizione può essere iniziata con l'aumentare della% di acetonitrile.
Figura 1: Teoria della cromatografia in fase inversa
Le biomolecole che sono meno idrofobiche / più polari saranno eluite per prime mentre le molecole più idrofobiche verranno eluite successivamente. RPC è la tecnica cromatografica con la massima risoluzione.
Cos'è la cromatografia di interazione idrofobica
La cromatografia di interazione idrofobica (HIC) è l'altra tecnica utilizzata nella separazione delle biomolecole in base all'idrofobicità in condizioni moderate. È una tecnica ideale per la purificazione delle proteine quando i campioni devono essere sottoposti a precipitazione di solfato di ammonio nella concentrazione iniziale del campione e nella pulizia. L'elevato livello di sale durante la precipitazione del solfato di ammonio aumenta l'interazione tra componenti idrofobici.
Figura 2: Effetto della concentrazione di sali alti sulle interazioni idrofobiche
Il mezzo idrofobico di HIC è costituito da una matrice inerte di particelle sferiche rivestite con ligandi contenenti gruppi alchilici o arilici. Le interazioni idrofobiche si verificano sotto concentrazioni saline moderatamente alte (tipicamente solfato di ammonio 1-2 M o NaCl 3 M). Il buffer di avvio assicura il legame delle proteine di interesse per il terreno mentre si lavano via le impurità. Il tampone di eluizione contiene una bassa concentrazione di sale, indebolendo l'interazione tra le proteine e la fase stazionaria.
Somiglianze tra cromatografia a fase inversa e cromatografia di interazione idrofobica
- La fase inversa e la cromatografia di interazione idrofobica sono due tecniche utilizzate nella separazione delle biomolecole in base alla loro idrofobicità.
- La fase mobile di entrambe le tecniche è l'acqua o un solvente organico.
- Usano colonne del letto imballato.
- Il buffer di avvio assicura il legame delle molecole desiderate alla colonna.
- Le molecole con la più bassa idrofobicità possono eluire per prime mentre più molecole idrofobiche possono eluire successivamente.
- La fase di lavaggio finale eluisce le molecole più strettamente legate.
- La risoluzione di entrambe le tecniche è una combinazione di selettività (grado di separazione tra i picchi), efficienza (la capacità di produrre picchi stretti e simmetrici) della tecnica, la massa del campione e il tempo di ritenzione.
Differenza tra cromatografia a fase inversa e cromatografia di interazione idrofobica
Definizione
La cromatografia a fase inversa (RPC) si riferisce alla tecnica di separazione a risoluzione più alta basata sull'idrofobicità delle molecole in una miscela mentre la cromatografia di interazione idrofobica (HIC) si riferisce a un tipo di tecnica di separazione basata sull'idrofobicità ma, in condizioni relativamente miti.
idrofobicità
L'RPC opera in condizioni più idrofobiche mentre l'HIC opera in condizioni idrofobiche relativamente miti.
interazioni
La cromatografia in fase inversa porta a interazioni più forti tra le molecole e la fase stazionaria che deve essere invertita durante l'eluizione da un modificatore organico mentre l'HIC porta a interazioni moderatamente alte tra la fase stazionaria e le molecole.
Mezzi idrofobi
RPC utilizza perline di silice ricoperte da catene di carbonio o, nanopolimeri idrofobi mentre HIC utilizza una matrice inerte di particelle sferiche rivestite con ligandi contenenti gruppi alchilici o arilici.
Avvia buffer
Il tampone di avvio in RPC utilizza acido trifluoroacetico (TFA) mentre il tampone di inizio di HIC utilizza concentrazioni di sale moderatamente alte.
eluizione
L'aumento percentuale di acetonitrile inizia l'eluizione in RPC mentre la concentrazione di sale decrescente inizia l'eluizione in HIC.
Risoluzione
La cromatografia in fase inversa è la tecnica cromatografica con la più alta risoluzione mentre la risoluzione di HIC è bassa rispetto a RPC.
applicazioni
L'RPC viene utilizzato nella separazione di proteine, peptidi e oligonucleotidi mentre l'HIC è utilizzato principalmente nella purificazione delle proteine.
Conclusione
La cromatografia in fase inversa è la tecnica cromatografica con la più alta risoluzione, che opera in condizioni altamente idrofobiche. Ma, HIC opera in condizioni idrofobiche moderate. RPC e HIC sono i due tipi di tecniche di separazione basate sull'idrofobicità. La principale differenza tra RPC e HIC è il grado di idrofobicità utilizzato in ciascuna tecnica.
Riferimento:
1. Interazione idrofobica e cromatografia a fase inversa: principi e metodi. GE Healthcare, 2006. Disponibile qui
Cortesia dell'immagine:
1. "Schema di inversione graduale di fase inversa" di Nategm - Opera propria (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia
2. "Hicsalt" di Daliak in inglese Wikibooks - Trasferito da en.wikibooks a Commons. (Dominio pubblico) via Commons Wikimedia
