Differenza tra pagina SDS e Western Blot
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Differenza chiave - Pagina SDS vs Western Blot
Il western blotting è una tecnica che rileva una proteina specifica da un campione di proteine. Questa tecnica viene eseguita tramite diversi passaggi chiave: elettroforesi su gel, macchinazione e ibridazione. Elettroforesi su gel di poliacrilammide di sodio dodecil solfato (Pagina SDS) è una sorta di tecnica di elettroforesi su gel che viene utilizzata per separare le proteine in base alle loro dimensioni (pesi molecolari). Western blot è un foglio speciale di una membrana assorbente che viene utilizzato per trasferire lo stesso modello delle proteine nella pagina SDS. La differenza chiave tra pagina SDS e macchia occidentale è quella Pagina SDS consente la separazione delle proteine in una miscela mentre Western Blot consente il rilevamento e la quantificazione di una specifica proteina da una miscela. Entrambi sono utili negli studi di analisi delle proteine.
CONTENUTO
1. Panoramica e differenza chiave
2. Cos'è la pagina SDS
3. Cos'è Western Blot
4. Confronto affiancato - Pagina SDS vs Western Blot
5. Sommario
Cos'è la pagina SDS?
La pagina SDS è una tecnica di elettroforesi su gel utilizzata per la separazione delle proteine. È comunemente usato in biochimica, genetica, medicina legale e biologia molecolare. Una volta estratte le proteine dal campione, vengono eseguite su un gel formato da SDS e poliacrilammide. L'SDS è un detergente anionico che viene utilizzato per linearizzare le proteine (denaturanti) e per conferire una carica negativa a proteine linearizzate proporzionali alla loro massa molecolare. Il poliacrilammide diventa il solido supporto per il gel. Le proteine denaturate che sono caricate negativamente migrano verso l'estremità positiva dell'apparato attraverso il gel. Secondo le dimensioni delle proteine, le velocità di migrazione differiscono tra le proteine e la separazione avviene. Pertanto, la pagina SDS è utile per la separazione delle singole proteine in base alle loro dimensioni.
La preparazione del gel di poliacrilammide per il frazionamento delle proteine è un passo fondamentale nella pagina SDS. La corretta concentrazione di poliacrilammide e il tipo di agente di reticolazione usato influenzano fortemente le proprietà fisiche del gel, il che rende effettiva la separazione delle diverse proteine. Le dimensioni dei pori del gel devono essere gestite correttamente per una separazione efficace. Tuttavia, la pagina SDS è considerata una tecnica di separazione proteica ad alta risoluzione.
La tecnica della pagina SDS ha un limite importante nell'analisi delle proteine. Poiché la SDS denatura le proteine prima della separazione, non consente la rilevazione di attività enzimatica, interazioni di legame proteico, cofattori proteici, ecc..
Figura 01: Pagina SDS
Cos'è Western Blot?
La tecnica Western blot consente di rilevare una specifica proteina da una miscela di proteine e di misurare la quantità e il peso molecolare della proteina. Western blot è la membrana utilizzata durante la procedura di blotting per ottenere l'immagine speculare dei pattern proteici nel gel SDS-polyacrylamide. La membrana utilizzata per il western blotting è costituita principalmente da nitrocellulosa o polivinilidendifluoruro (PVDF). La membrana con la proteina trasferita può essere utilizzata per identificare la proteina desiderata. Richiede anticorpi di alta qualità per la rilevazione della proteina desiderata mediante ibridazione. L'anticorpo si lega al suo antigene specifico e rivela la presenza dell'antigene desiderato che è una proteina.
Il trasferimento delle proteine dal gel di poliacrilammide SDS al western blot viene eseguito mediante elettroblotting. È un metodo efficace e veloce che estrae le proteine dall'elettroforesi e passa sulla membrana di nitrocellulosa (western blot).
Figura 02: Western Blot
Qual è la differenza tra pagina SDS e Western Blot?
Pagina SDS vs Western Blot | |
| La pagina SDS è una tecnica di elettroforesi su gel. | Western blot è una tecnica che viene eseguita su una membrana per rilevare una proteina specifica da una miscela. |
| Uso | |
| La pagina SDS consente la separazione delle proteine in base alle loro dimensioni. | Western blot consente il trasferimento di proteine sul gel di pagina SDS senza modificarne il pattern e consente l'ibridazione con anticorpi specifici. |
| svantaggi | |
| La denaturazione delle proteine, l'alto costo e la presenza di sostanze chimiche neurotossine sono gli svantaggi di questa tecnica. | Questa tecnica richiede molto tempo e richiede una buona esperienza personale e specifiche condizioni controllate. |
Riepilogo - Pagina SDS vs Western Blot
La pagina SDS e il western blot sono due metodi coinvolti nell'analisi delle proteine. La pagina SDS consente una facile separazione delle proteine su un gel in base al loro peso molecolare. Western blot aiuta a confermare la presenza e la quantità di una proteina specifica attraverso l'ibridazione con anticorpi specifici. Questa è la differenza tra pagina SDS e macchia occidentale.
Riferimenti:
1. Blancher, C. e A. Jones. "SDS -PAGE e Western Blotting Techniques." Metodi nella medicina molecolare. U.S. National Library of Medicine, n. Web. 27 marzo 2017
2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig e David H. Petering. "Native SDS-PAGE: separazione elettroforetica ad alta risoluzione delle proteine con conservazione delle proprietà native tra cui gli ioni metallici legati". Metallomica: scienza biometrica integrata. U.S. National Library of Medicine, maggio 2014. Web. 27 marzo 2017.
Cortesia dell'immagine:
1. "SDS-PAGE Electrophoresis" di Bensaccount su Wikipedia in inglese (CC BY 3.0) attraverso Commons Wikimedia
2. "Western blot 114A" di Amanthabagdon - Opera propria (dominio pubblico) via Commons Wikimedia
