Differenza tra Phusion e Taq Polymerase

Differenza chiave - Phusion vs Taq polimerasi
 

Le DNA polimerasi sono enzimi ampiamente usati nelle tecniche di biologia molecolare e sono naturalmente presenti in tutti gli organismi che subiscono la replicazione del DNA. Sono gli enzimi polimerici chiave che coinvolgono durante la replicazione. La DNA polimerasi è in grado di aggiungere nucleotidi all'estremità libera 3 'del filamento di DNA, causando così l'estensione di un nuovo filamento. Allo stato attuale, a causa degli sviluppi della biologia molecolare nella diagnostica delle malattie e nelle applicazioni industriali, è importante produrre polimerasi aventi varie proprietà benefiche. Ciò aumenta la precisione del metodo e lo rende una tecnica più rapida. Phusion e Taq polimerasi sono due enzimi polimerici termostabili commercialmente utilizzati in applicazioni molecolari speciali. La fusione è una DNA polimerasi isolata da Pyrococcus furiosus ed è usato principalmente negli esperimenti di clonazione per aumentare la fedeltà. Taq DNA Polymerase è la DNA polimerasi standard utilizzata nella Polymerase Chain Reaction (PCR) ed è isolata dal batterio termostabile; Thermus aquaticus. Il differenza fondamentale tra i due enzimi è il microrganismo sorgente. La fusione è isolata dall'estremofilo, Pyrococcus furiosus mentre la Taq polimerasi è isolata dal termofilo, Thermus aquaticus.

CONTENUTO

1. Panoramica e differenza chiave
2. Cos'è Phusion
3. Cos'è la Taq Polymerase
4. Somiglianze tra Phusion e Taq Polymerase
5. Confronto Side by Side - Phusion vs Taq Polymerase in forma tabulare
6. Sommario

Cos'è Phusion?

DNA polimerasi di fusione è una nuova polimerasi prodotta isolando l'enzima da Pyrococcus furiosus, che è un Archaea estremofilo. Questi microbi risiedono in condizioni di temperatura estremamente elevata, rendendo così la polimerasi una polimerasi altamente termostabile. La polimerasi di fusione viene utilizzata per ottenere una fedeltà estrema rispetto alla polimerasi termostabile convenzionale; Taq polimerasi. La polimerasi di fusione è in grado di amplificare modelli lunghi fino a 7,5 kb di DNA genomico. La capacità di polimerizzazione ottimale di Phusion polimerasi è a 72⁰ C. La Phusion viene anche utilizzata nella clonazione di prodotti per il sequenziamento, l'analisi delle espressioni e l'analisi delle mutazioni.

La DNA polimerasi di fusione ha l'attività di esonucleasi 3 '- 5'. Ciò consente la correzione di bozze del filamento appena sintetizzato dopo la sintesi. Quindi, i disallineamenti nucleotidici sono facilmente riparabili. Pertanto, ha un tasso di errore inferiore. I vantaggi complessivi di Phusion polimerasi sono;

• Fedeltà estrema
• Alta velocità e tempo di estensione ridotto
• Reazioni robuste e richiede ottimizzazione minima
• Ad alto rendimento

Figura 01: Phusion

Il principale svantaggio di Phusion polimerasi è che è inibito in presenza di desossiridina trifosfato (dUTP). Quando i DUTP vengono accumulati nella miscela di reazione, possono inibire le azioni di Phusion polimerasi. Ciò è evitato trattando la miscela di reazione con dUTPase prima di aggiungere l'enzima. Allo stato attuale, una soluzione resistente alla DUTP della Phusion polimerasi nota come Pfu Turbo viene utilizzata al posto della Phusion polimerasi come rimedio a questo problema.

Cos'è la Taq Polymerase?

DNA polimerasi Taq l'invenzione ha rivoluzionato il campo della biologia molecolare. Risolve un grosso problema nell'amplificazione del DNA. La DNA polimerasi Taq è un enzima polimerico termostabile estratto ed isolato dal batterio termofilo, Thermus aquaticus. La scoperta di questo enzima porta allo sviluppo della PCR. Questo enzima ha permesso l'uso della reazione a catena della polimerasi nell'amplificazione del DNA invece delle tecniche convenzionali di clonazione laboriosa. La PCR è ora utilizzata in campo diagnostico molecolare, agricolo e industriale con molte nuove varianti aggiunte alla tecnica.

Figura 02: Taq polimerasi

Le funzioni della DNA polimerasi Taq alla gamma di temperature ottimale tra 72⁰C - 80⁰La DNA polimerasi di C. Taq richiede un cofattore; magnesio per la sua funzione. La Taq polimerasi non ha la capacità di correzione di bozze 3 '- 5', pertanto, il tasso di errore della Taq DNA polimerasi è elevato rispetto ai più recenti tipi di DNA polimerasi come la polimerasi di Phusione ecc. Tuttavia, la popolarità della Taq DNA polimerasi rimane la stesso attraverso il mondo della scienza grazie alla praticità e alla flessibilità dell'enzima.

Quali sono le somiglianze tra Phusion e Taq polimerasi?

• Entrambi gli enzimi di Phusion e Taq polimerasi sono enzimi polimerizzanti in grado di aggiungere nucleotidi all'estremità 3 'libera del filamento di DNA.
• Sia la Phusion che la Taq polimerasi richiedono una sequenza di primer per iniziare la polimerizzazione.
• Sia Phusion che Taq polimerasi sono termicamente stabili.
• Sia Phusion che Taq polimerasi vengono utilizzate nei meccanismi PCR per amplificare il DNA.
• Quando si aggiunge la polimerasi alla miscela di reazione, si aggiungono per ultimo sia Phusion che Taq polimerasi per garantire l'efficienza dell'enzima.
• Sia la Phusion che la Taq polimerasi sono sintetizzate commercialmente per scopi sperimentali di biologia molecolare.
• Sia Phusion che Taq polimerasi richiedono un cofattore per completare la sua funzione.

Qual è la differenza tra Phusion e Taq Polymerase?

Phusion vs Taq Polymerase
La fusione è una DNA polimerasi isolata da Pyrococcus furiosus ed è usato principalmente negli esperimenti di clonazione per aumentare la fedeltà.	Taq DNA Polymerase è la DNA polimerasi standard utilizzata nella Polymerase Chain Reaction (PCR) ed è isolata dal batterio termostabile, Thermus aquaticus.
Organismo di origine
La fusione viene estratta dall'archaea estremofila - Pyrococcus furiosus.	Queste opere letterarie spaziano dal periodo di colonizzazione al periodo di decolonizzazione.
Capacità di leggere la prova
L'abilità di lettura delle prove 3 '- 5' è presente in Phusion.	L'abilità di lettura delle prove 3 '- 5' è assente nella Taq polimerasi.
Fedeltà
L'alta fedeltà è lì con Phusion.	Taq polimerasi mostra bassa fedeltà.
Amplificazione
La fusione è in grado di amplificare lunghi frammenti di DNA.	La Taq polimerasi è in grado di amplificare frammenti di DNA molto più brevi.
avvelenamento da intossicazione
L'azione di fusione è inibita dall'accumulazione dispari.	La Taq polimerasi non è inibita dal dUPT.

Sommario - Phusion vs Taq polimerasi

Phusion e Taq DNA polimerasi sono due polimerasi termostabili che vengono utilizzate nelle tecniche di PCR. La fusione è una polimerasi isolata dall'estremofilo, Pyrococcus furiosus mentre, Taq è isolato dai batteri termostabili Thermus aquaticus. La scoperta della DNA polimerasi Taq porta all'invenzione della PCR. La fusione ha molti vantaggi rispetto a Taq che ha reso Phusion un'opzione migliore nella produzione di DNA ad alta fedeltà. Tuttavia, la Taq polimerasi viene ancora utilizzata come enzima polimerico standard nella PCR. Questa è la differenza tra Phusion e Taq polimerasi.

Riferimento:

1. Biolabs, New England. "Taq DNA Polymerases." New England Biolabs: Reagenti per l'industria delle scienze della vita. Disponibile qui  
2. "Phusion DNA Polymerase." New England Biolabs. Disponibile qui 

Cortesia dell'immagine:

1.'GAM illustrato da Nivin Nasri'By NivinN - Opera propria, (CC BY-SA 4.0) attraverso Commons Wikimedia  
2.Taq'By Adenosine - Opera propria, (CC BY-SA 3.0) attraverso Commons Wikimedia