Differenza tra ibridazione in situ e immunoistochimica

Differenza chiave: ibridazione in situ e immunoistochimica
 

La diagnostica del cancro e delle malattie infettive è una tendenza popolare in cui vengono utilizzate nuove tecniche basate su proteomica e genomica allo scopo di identificare tumori o cellule infettive, la sua proliferazione e i siti di sviluppo cellulare e analizzare le basi genetiche delle malattie più trasmissibili e non trasmissibili. Ciò si tradurrà in un'accurata elaborazione e progettazione dei farmaci e nello sviluppo di terapie personalizzate per le malattie. L'ibridazione in situ (ISH) e l'Immunohistochemistry (IHC) sono due tecniche ampiamente utilizzate nella biologia del cancro e la differenza chiave tra l'ibridazione in situ e l'immunochimica si trova nelle molecole utilizzate nella procedura di analisi. In ISH, le sonde dell'acido nucleico sono utilizzate in analisi mentre, in IHC, gli anticorpi monoclonali e policlonali sono utilizzati per le determinazioni diagnostiche.

CONTENUTO

1. Panoramica e differenza chiave
2. Cos'è l'ibridazione in situ
3. Cos'è Immunohistochemistry
4. Somiglianze tra ibridazione in situ e immunoistochimica
5. Confronto affiancato - Ibridazione in situ e immunoistochimica in forma tabulare
6. Sommario

Cos'è l'ibridazione in situ (ISH)?

L'ibridazione in situ è ​​una tecnica di ibridazione dell'acido nucleico che viene eseguita direttamente su una porzione o sezione di tessuto, nell'intero tessuto o nelle cellule. La tecnica dipende dalla teoria dell'accoppiamento di base complementare di Watson Crick, risultante in ibridi DNA-DNA o ibridi DNA-RNA in grado di rilevare geni mutati o identificare il gene di interesse richiesto. Sequenze di DNA a filamento singolo, sequenze di DNA a doppio filamento, sequenze di RNA a filamento singolo o sequenze di oligonucleotidi sintetici sono utilizzate come sonde durante la tecnica di ibridazione e queste sonde sono etichettate con un fosforo radioattivo all'estremità 5 'per procedure di identificazione su autoradiografia o etichettate utilizzando coloranti fluorescenti . Esistono diversi tipi di tecniche ISH disponibili in base al tipo di sonda utilizzata e al tipo di tecnica di visualizzazione seguita.

Figura 01: ibridazione in situ fluorescente

Ci sono molte applicazioni di ISH, principalmente nella diagnostica molecolare delle malattie infettive al fine di identificare la presenza di agenti patogeni e confermare l'agente patogeno attraverso la diagnostica molecolare. Viene anche utilizzato nei campi della biologia dello sviluppo, del cariotipo e dell'analisi filogenetica e della mappatura fisica dei cromosomi.

Cos'è Immunohistochemistry (IHC)?

Nella tecnica di IHC, la principale molecola analizzata è l'antigene. Durante l'IHC, gli anticorpi monoclonali e policlonali sono utilizzati per determinare la presenza di antigeni in caso di infezione o stato di proliferazione cellulare maligna. La tecnica è basata sul legame antigene-anticorpo e per questa tecnica vengono utilizzate etichette enzimatiche; una di queste applicazioni è il test ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay). I marcatori possono anche essere anticorpi marcati fluorescenti o anticorpi marcati con radio.

Figura 02: Immunoistochimica

IHC è ampiamente utilizzato per il rilevamento delle cellule tumorali. Le procedure diagnostiche riguardano gli antigeni presenti sulle cellule tumorali per identificare e caratterizzare il tumore. La stessa procedura è incorporata per diagnosticare agenti infettivi. Gli anticorpi monoclonali e policlonali sono anche usati per analizzare diversi prodotti genici abilitando la reazione di legame dell'anticorpo-anticorpo tra la proteina desiderata e l'anticorpo sintetico somministrato.

Quali sono le somiglianze tra ibridazione in situ e immunoistochimica?

• ISH e IHC sono reazioni altamente specifiche.
• Entrambe le tecniche sono estremamente accurate.
• Entrambe le tecniche possono essere utilizzate nella diagnostica per il cancro e le malattie infettive.
• Queste tecniche sono eseguite in ambienti in vitro sterili.
• Entrambe sono tecniche rapide che forniscono risultati riproducibili.
• ISH e IHC utilizzano metodi di rilevamento come l'etichettatura radio e le tecniche di fluorescenza.

Qual è la differenza tra l'ibridazione in situ e l'immunoistochimica?

Ibridazione in situ vs immunoistochimica
ISH è una tecnica di ibridazione dell'acido nucleico che viene eseguita direttamente su una porzione o sezione di tessuto o sull'intero tessuto.	L'IHC è una tecnica in cui gli anticorpi monoclonali e policlonali sono utilizzati per determinare la presenza di antigeni, che sono speciali marcatori proteici posti sulle superfici cellulari.
Tipo di molecole biologiche analizzate
ISH analizza gli acidi nucleici.	L'IHC analizza gli antigeni delle proteine.
Base della reazione biochimica
L'associazione di base complementare tra DNA-DNA o DNA-RNA avviene in questa tecnica.	Le interazioni antigene-anticorpo sono coinvolte nell'immunoistochimica.
Metodi di rilevamento legati all'enzima
I metodi di rilevamento legati all'enzima non possono essere utilizzati in ISH.	I metodi di rilevamento legati all'enzima possono essere utilizzati in IHC.

Riepilogo: ibridazione in situ e immunoistochimica

La diagnostica molecolare è un metodo rapido e di conferma che può essere utilizzato per identificare una malattia non trasmissibile come cancro o malattia trasmissibile come l'HIV o la tubercolosi basata sui marcatori molecolari presenti sulle cellule che portano alla manifestazione della malattia. I marcatori molecolari possono essere presenti sotto forma di proteine ​​espresse oa livello genetico in base alle quali vengono introdotte diverse nuove tecniche per aumentare l'efficienza e sono meno laboriose, sebbene vi sia un costo elevato implicato con queste tecniche. Pertanto l'ISH dipende dalla formazione di DNA-DNA o DNA-RNA ibrido e l'IHC dipende dalle reazioni specifiche tra l'anticorpo e l'antigene. Questa è la differenza tra l'ibridazione in situ.

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Riferimenti:

1. Duraiyan, Jeyapradha, et al. "Applicazioni di immunoistochimica". Journal of Pharmacy & Bioallied Sciences, Medknow Publications & Media Pvt Ltd, agosto 2012, Disponibile qui. Accesso 24 agosto 2017.
2. "In Situ Hybridization (ISH)." National Center for Biotechnology Information, U.S. National Library of Medicine, Disponibile qui. Accesso 24 agosto 2017.

Cortesia dell'immagine:

1. "PESCE (ibridazione in situ fluorescente)" di MrMatze - Opera propria (CC BY-SA 3.0) attraverso Commons Wikimedia
2. "Immunohistochemicalstaining2" di Imoen nella lingua inglese di Wikipedia (CC BY-SA 3.0) attraverso Commons Wikimedia