Differenza tra Gram Stain e Acid Fast

Differenza chiave - Gram Stain vs Acid Fast

I batteri sono microrganismi molto piccoli. Sono trasparenti e la loro individuazione è difficile in condizioni di vita e non trattate. Pertanto, vari metodi di colorazione sono sviluppati per facilitare il rilevamento dei batteri. Esistono tre principali tipi di tecniche di colorazione: semplice colorazione, colorazione differenziale e colorazione strutturale. La colorazione differenziale è una tecnica che utilizza più di una macchia per differenziare i batteri. La colorazione di Gram e le macchie acido-resistenti sono conosciute più comunemente come macchie differenziali. La colorazione di Gram è una tecnica di colorazione differenziale, che separa i batteri in due gruppi noti come batteri Gram-positivi e batteri Gram-negativi. La colorazione acido-rapida è una macchia differenziale utilizzata per identificare organismi acido-resistenti come Mycobacterium da organismi veloci non acidi. Questa è la differenza chiave tra la colorazione di Gram e la colorazione Acid Fast.

CONTENUTO

1. Panoramica e differenza chiave
2. Che cos'è Gram Stain
3. Cos'è Acid Fast
4. Somiglianze tra Gram Stain e Acid Fast
5. Confronto affiancato - Gram Stain vs Acid Fast in Tabular Form
6. Sommario

Che cos'è Gram Stain?

La colorazione di Gram è un'importante tecnica di colorazione differenziale utilizzata per l'identificazione batterica in microbiologia. Questa tecnica fu introdotta dal batterio danese Hans Christian Gram nel 1884. La colorazione di Gram classifica i batteri in due gruppi principali chiamati gram positivi e gram negativi, che sono molto importanti nella classificazione e identificazione batterica. I microbiologi eseguono la colorazione del grammo come primo passo nella caratterizzazione batterica durante i loro studi.

I batteri sono raggruppati in base alle differenze nella loro parete cellulare. I batteri Gram-positivi sono composti da uno spesso strato di peptidoglicano nella loro parete cellulare mentre i batteri gram-negativi sono composti da uno strato sottile di peptidoglicano nella loro parete cellulare. Il risultato della colorazione del grammo sarà basato sulla differenza nello spessore dello strato di peptidoglicano della parete cellulare.

La colorazione di Gram è eseguita utilizzando quattro diversi reagenti e precisamente; macchia primaria, mordente, decolorante e contro-macchia. Crystal violet e safranin sono usati come coloranti primari e controcorrenti, rispettivamente mentre i grammi di iodio e il 95% di alcol sono usati rispettivamente come mordente e decolorante. I passaggi di base della colorazione dei grammi sono i seguenti;

Uno striscio batterico viene preparato su un vetrino pulito, fissato al calore e raffreddato.
Lo smear è inondato di crystal violet per 1 - 2 minuti.
Lo smear è sciacquato con acqua corrente a flusso lento per rimuovere le macchie in eccesso.
Lo iodio Grammo viene applicato allo smear per 1 minuto.
Il risciacquo viene risciacquato con acqua corrente lenta
L'imbrattatura viene lavata con alcol al 95% per 2 - 5 secondi e risciacquata con acqua corrente lenta.
La macchia è contro-colorata con safranin per 1 minuto
Il risciacquo viene risciacquato con acqua corrente lenta, asciugata e osservata al microscopio.

Alla fine della colorazione del grammo, i batteri gram negativi saranno osservati in rosa mentre i batteri positivi saranno osservati in color porpora.

Figura 01: batteri Gram-negativi e Gram-positivi

L'esito della colorazione dei grammi è determinato dallo spessore dello strato di peptidoglicano nella loro parete cellulare. Durante la fase di decolorazione, la macchia primaria e il mordente vengono facilmente rimossi dai batteri gram negativi e diventano incolori poiché hanno uno strato di peptidoglicano sottile. La macchia primaria viene trattenuta nei batteri gram positivi poiché hanno uno spesso strato di peptidoglicano. La contro-macchia non sarà efficace per i batteri gram-positivi a causa della ritenzione della macchia primaria. Quindi, grammi di batteri positivi saranno visibili nel colore della macchia primaria, cioè il colore viola. La contro-macchia macchierà i batteri gram-negativi e saranno visibili nel colore scelto, che è il colore safranin. Quindi, è facile classificare i batteri in due gruppi per colorazione di grammo ed è prezioso nella differenziazione e identificazione batterica.

Cos'è Acid Fast?

La resistenza agli acidi è una proprietà fisica di alcuni batteri, in particolare la loro resistenza alla decolorazione da parte degli acidi durante le procedure di colorazione. Una volta colorati, questi microrganismi resistono all'acido diluito o alle procedure di decolorazione a base di etanolo comuni in molti protocolli di colorazione. Quindi, il nome 'acido veloce' è dato a quegli organismi. Questa proprietà è mostrata a causa di un alto livello di materiale ceroso (acidi micolici) nelle loro pareti cellulari. Questo test è fondamentale per l'identificazione di Mycobacterium tuberculosis.

Figura 2: micobatteri a rapida acidità

Questa colorazione acido rapida fu sviluppata da Paul Ehrlich nel 1882. La tecnica dell'acido rapido di Ehrlich fu modificata da Ziehl-Neelsen e ora viene usata più frequentemente. La procedura di colorazione rapida acida coinvolge tre diversi reagenti. Carbol fuschin è usato come macchia primaria. L'alcol acido è usato come agente decolorante. Il blu di metilene è usato come contro-macchia. La procedura di colorazione viene eseguita come segue.

La macchia primaria (carbol fuchsin) viene applicata al campione fisso sul vetrino (tutte le cellule saranno colorate in rosso).
Il vetrino viene riscaldato mediante vapore per 5 minuti, che spinge le macchie nelle cellule correttamente.
Quindi viene aggiunta la soluzione decolorante (questo rimuove il colorante rosso da tutte le cellule tranne i batteri acido-veloci).
Il blu di metilene è aggiunto come controcolore (colora tutte le cellule batteriche decolorate).
I batteri acidi e acide rimangono rossi mentre i batteri veloci non acidi si colorano di blu.

Quali sono le somiglianze tra Gram Stain e Acid Fast?

Gram stain e Acid fast sono due tecniche di colorazione differenziale.
Entrambe le tecniche classificano i batteri in due gruppi.
Entrambe le tecniche utilizzano due macchie e una decolorante.

Qual è la differenza tra Gram Stain e Acid Fast?

Gram Stain vs Acid Fast
La colorazione di Gram è una tecnica di colorazione differenziale, che separa i batteri in due gruppi batteri Gram-positivi e batteri Gram-negativi.	La colorazione acido-rapida è una macchia differenziale utilizzata per identificare gli organismi acido-resistenti da organismi veloci non acidi.
Macchia primaria
Il cristalvioletto è la macchia primaria comunemente usata nella colorazione del grammo.	Carbol fuchsin è la macchia primaria utilizzata in acido veloce.
Agente decolorante
Il 95% di alcol è usato come agente decolorante nella colorazione di Gram.	L'alcol acido è usato come agente decolorante in acido veloce.
Contro Macchia
La colorazione di Gram utilizza safranin come contro-macchia.	La colorazione acida rapida utilizza il blu di metilene come colorante.
Osservazione
I batteri Gram negativi si osservano nel colore scelto e grammi i batteri positivi sono osservati nel colore viola.	I batteri Acid Fast sono osservati nel colore rosso e i batteri non acidi veloci sono osservati nel colore blu.

Riepilogo: Gram Stain vs Acid Fast

La visualizzazione di microrganismi nello stato di vita è difficile. Pertanto, le colorazioni biologiche e le procedure di colorazione sono ampiamente utilizzate per studiarne le proprietà. La colorazione differenziale è un tipo di tecnica di colorazione utilizzata per differenziare i batteri. La colorazione di Gram e la colorazione rapida con acido sono due tecniche di colorazione differenziale. La colorazione di Gram differenzia batteri gram-negativi e batteri gram-positivi in base allo spessore delle loro pareti cellulari. La colorazione rapida acida differenzia batteri veloci acidi da batteri veloci non acidi in base al contenuto di acido micolico nella parete cellulare. Questa è la differenza tra l'acido veloce e la colorazione di Gram.

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Riferimenti:

1. Aryal, Sagar. "Principio, procedura, interpretazione ed esempi di colorazione acido-rapida". Note di microbiologia online. 8 aprile 2017. Web. Disponibile qui. 20 luglio 2017.
2. Macchie differenziali per identificare i batteri: Gram, acido-veloce ed endospora. N., n. web. Disponibile qui. 20 luglio 2017.

Cortesia dell'immagine:

1. "Linfonodo - infezione micobatterica atipica (MAI) - macchia AFB" di Yala Rosen (CC BY-SA 2.0) attraverso Flickr
2. "Gram stain 01" di Y tambe - Archivio di Y tambe (CC BY-SA 3.0) attraverso Commons Wikimedia

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