Differenza tra tripsinizzazione calda e fredda

Differenza chiave - Caldo vs Freddo tripsinizzazione
 

La tripsinizzazione calda e fredda sono due metodi usati nella disaggregazione enzimatica delle cellule nella coltura di cellule animali. Il differenza fondamentale tra la tripsinizzazione calda e fredda, come suggeriscono i nomi, dipende dalla temperatura alla quale viene aggiunta la tripsina per la disaggregazione cellulare. La tripsinizzazione calda avviene a temperature più elevate (36,5 - 37 ⁰C) mentre la tripsinizzazione a freddo avviene in condizioni di bassa temperatura.

Durante il processo di coltura cellulare primaria di cellule animali, ci sono tre metodi principali utilizzati e hanno dimostrato di avere successo. I tre metodi includono la disaggregazione meccanica delle cellule, la disaggregazione enzimatica delle cellule e la tecnica dell'espianto primario. La disaggregazione enzimatica delle cellule porta all'isolamento delle cellule e viene effettuata dall'enzima di degradazione delle proteine ​​tripsina. Pertanto, questo processo è noto come tripsinizzazione. La tripsinizzazione può essere effettuata in due diverse condizioni: la tripsinizzazione calda e la tripsinizzazione fredda. La tripsinizzazione calda è il metodo di trattamento delle cellule con tripsina in condizioni calde a una temperatura di 36,5 - 37 ⁰C. La tripsinizzazione a freddo è il processo del trattamento con tripsina che si svolge in condizioni più fredde preferibilmente in ghiaccio mantenendo temperature molto basse.

CONTENUTO

1. Panoramica e differenza chiave
2. Cos'è la tripsinizzazione calda
3. Cos'è la tripsinizzazione fredda
4. Somiglianze tra tripsinizzazione calda e fredda
5. Confronto affiancato - Tripsinizzazione calda e fredda in forma tabulare
6. Sommario

Cos'è la tripsinizzazione calda?

La tripsinizzazione può essere effettuata per disaggregare i componenti cellulari al fine di isolare le cellule per produrre una coltura cellulare primaria. La tripsina è un enzima di degradazione delle proteine ​​e la miscela enzimatica utilizzata nella tripsinizzazione può essere un estratto grezzo o un prodotto purificato. Si dice che l'estratto grezzo sia più efficiente nella lisi proteica e nella disintegrazione cellulare poiché contiene altri enzimi degradativi.

La tripsinizzazione calda è il metodo enzimatico più comunemente utilizzato per la disaggregazione cellulare che si svolge in condizioni di temperatura più elevata. Prima del trattamento con tripsinizzazione, il tessuto desiderato viene tagliato in pezzi più piccoli. Facilita il facile processo di disaggregazione. Il tessuto sminuzzato viene quindi lavato in un mezzo speciale noto come mezzo di dissezione del sale basale.

Al completamento della fase di lavaggio, le cellule vengono trasformate in un pallone contenente l'enzima attivo, che è tripsina. Poiché questa tecnica implica un protocollo di tripsinizzazione caldo, la tripsina viene posta a una temperatura di circa 37 ⁰C per circa quattro ore.

Figura 01: tripsina

I contenuti sono mescolati e agitati utilizzando metodi di centrifugazione per la facilità del protocollo e per accelerare il processo di disaggregazione. Una volta raggiunto il tempo raccomandato, le cellule possono essere derivate dal supernatante. Le cellule derivate dal supernatante vengono quindi incubate ad una temperatura e un tempo particolare.

Cos'è la tripsinizzazione fredda?

La tripsinizzazione a freddo è l'altro tipo di tripsinizzazione che si svolge in condizioni fredde. In questa tecnica, le cellule che sono state tritate e lavate vengono poste in fiale su ghiaccio e quindi imbevute di tripsina. Il periodo di ammollo è molto più lungo - circa 6 - 24 ore.

Dopo il completamento della procedura di immersione, la tripsina viene rimossa dal lisato cellulare e i pezzi di tessuto vengono ulteriormente incubati a 37 ⁰C per circa 20 - 30 minuti. La disaggregazione delle cellule è determinata dal ripetuto pipettamento della miscela di tessuto. Ciò consentirà alle cellule di dissociarsi dalla membrana e arrivare al supernatante. Una volta che le cellule sono nel supernatante, vengono incubate e cresciute alla temperatura desiderata e al periodo di tempo desiderato.

Il metodo di tripsinizzazione a freddo ha diversi vantaggi

• Maggiore resa di cellule vitali in quanto il danno cellulare è ridotto al minimo. Il danno cellulare viene minimizzato non usando i passaggi di centrifugazione.
• Metodo molto conveniente.
• Meno laborioso.

La principale limitazione del metodo di tripsinizzazione a freddo è che non è possibile utilizzare grandi quantità in un'istanza.

Quali sono le somiglianze tra la tripsinizzazione calda e fredda?

• Entrambi i processi di tripsinizzazione calda e fredda utilizzano la tripsina enzimatica per la disaggregazione delle cellule.
• Sia i processi di tripsinizzazione caldi che quelli a freddo vengono utilizzati nelle procedure di coltura cellulare per la disaggregazione delle cellule.
• Nelle procedure di trattamento con tripsinizzazione sia calda che a freddo, le cellule derivano dal supernatante.

Qual è la differenza tra la tripsinizzazione calda e fredda?

Tripsinizzazione calda contro fredda
La tripsinizzazione calda è il metodo di trattamento delle cellule con tripsina in condizioni calde a una temperatura di 36,5 - 37 0.	La tripsinizzazione a freddo è il processo di trattamento con tripsina che avviene in condizioni più fredde preferibilmente in ghiaccio mantenendo temperature molto basse.
Protocollo
I pezzi di tessuto tritato sono mantenuti a 37 0C continuamente durante tutta la procedura.	I pezzi di tessuto sminuzzati vengono inizialmente mantenuti a temperature fredde e quindi mantenuti a 37 gradi 0.
Temperatura
La tripsinizzazione calda si verifica a 36,5 - 37 0	Tripsinizzazione a freddo si verifica a temperature ghiacciate.
Tempo consumato
Minor tempo richiesto per l'intero processo (circa 4 ore) di tripsinizzazione calda.	Tempo più lungo richiesto (circa 6 - 24 ore) per tripsinizzazione a freddo.
Rendimento di cellule vitali
Basso nella tripsinizzazione calda.	Alto nella tripsinizzazione fredda.
Uso della centrifugazione
La centrifugazione è necessaria per la disaggregazione delle cellule nella tripsinizzazione calda.	La centrifugazione non è richiesta nella tripsinizzazione fredda.
Quantità iniziale di tessuto per tripsinizzazione
Una maggiore quantità di tessuto può essere utilizzata nella tripsinizzazione calda.	Una piccola quantità di tessuto può essere utilizzata nella tripsinizzazione a freddo.
Danno alle cellule
Elevato a causa della centrifugazione nella tripsinizzazione calda.	Meno a causa della tripsinizzazione a freddo.

Sommario - Caldo contro Freddo tripsinizzazione

La tripsinizzazione è il metodo di utilizzo dell'enzima di degradazione delle proteine ​​tripsina per la disaggregazione e la preparazione di colture cellulari primarie durante il processo di coltura cellulare. Esistono due principali tecniche di tripsinizzazione basate sulle temperature utilizzate durante la procedura. Sono tripsinizzazione calda e fredda. Trypsinization caldo è effettuato a 37 anni ⁰C considerando che la tripsinizzazione a freddo viene effettuata in condizioni di ghiaccio freddo. Sebbene la tripsinizzazione a freddo richieda più tempo per il completamento, si dice che abbia una maggiore resa di cellule vitali. Ciò è dovuto al fatto che il danno cellulare è ridotto al minimo nella tripsinizzazione a freddo poiché non utilizza vigorose fasi di centrifugazione. Questa è la differenza tra tripsinizzazione calda e fredda.

Riferimento:

1. "tripsinizzazione". Tripsinizzazione: una panoramica | Argomenti ScienceDirect. Disponibile qui 
2. "Coltura cellulare primaria: 3 tecniche (con diagramma)." Discussione sulla biologia, 16 ottobre 2015. Disponibile qui  

Cortesia dell'immagine:

1. "Trypsin active site" di Fdardel - Opera propria, (CC BY-SA 3.0) attraverso Commons Wikimedia