Differenza tra clonazione e sottoclon

Differenza chiave - Clonazione vs Sottoclone
 

La clonazione e il subcloning sono procedure molecolari biologiche che creano cellule o organismi geneticamente identici che portano il DNA o il gene di interesse. La clonazione è una tecnica che comporta l'inserimento del gene o del DNA interessato in un vettore, la sua replica all'interno di un batterio ospite e la produzione di cellule o organismi che sono copie esatte del corredo genetico. Il subcloning è una tecnica che prevede l'inserimento del gene di interesse, che è già inserito in un vettore, in un vettore secondario, la sua replica all'interno di un batterio ospite e la produzione di copie geneticamente identiche di cellule o organismi. La differenza chiave tra clonazione e sottoclona è quella, nella clonazione, il gene di interesse, una volta legato in un vettore, continua il processo di clonazione mentre, nel subcloning, il gene già clonato di interesse viene separato dal vettore genitore e inserito nuovamente in un vettore ricevente e continua il processo.

CONTENUTO
1. Panoramica e differenza chiave
2. Cos'è la clonazione
3. Cos'è il subcloning
4. Confronto affiancato - Clonazione vs Sottoclone
5. Sommario

Cos'è la clonazione?

La clonazione è la procedura che produce organismi o cellule geneticamente identici. In natura, la clonazione avviene nei modi di riproduzione asessuata. Quando non vi è alcuna ricombinazione genetica o alterazione, le cellule figlie ricevono lo stesso corredo genetico del genitore. Gli organismi procariotici ed eucariotici creano cloni mediante fissione binaria, germogliamento, mitosi, ecc. Nella biologia molecolare, i geni della clonazione o frammenti specifici del DNA sono un metodo popolare per studiare la struttura e la funzione di quella particolare sezione del DNA..

L'obiettivo principale della clonazione molecolare è di produrre milioni di copie di cellule o organismi geneticamente identici recanti il ​​frammento di DNA di interesse (principalmente i geni). Crea organismi con copie genetiche esatte di un altro. Principalmente, i geni specifici sono clonati in studi molecolari per ottenere informazioni strutturali e funzionali e per il sequenziamento del DNA. Inoltre, per la produzione di proteine ​​specifiche o prodotti su larga scala, la clonazione è ampiamente utilizzata.

Procedura di clonazione

I passaggi fondamentali della procedura di clonazione sono i seguenti.

1. Identificazione e isolamento del gene di interesse. (Amplificazione del gene di interesse mediante PCR).
2. Digestione di restrizione del gene di interesse (Restrizione dell'endonucleasi taglia il gene).
3. Digestione di restrizione del DNA vettoriale. (Anche il DNA vettoriale viene tagliato usando la stessa endonucleasi di restrizione).
4. Inserimento del gene nel vettore e formazione della molecola ricombinante.
5. Trasformazione del vettore ricombinante in un batterio ospite.
6. Isolamento e identificazione dei batteri trasformati (il vettore plasmidico deve contenere un gene selezionabile, più comunemente un gene di resistenza agli antibiotici per schermare i batteri trasformati).
7. Espressione genica ricombinante nell'ospite.

Figura_01: Procedura di clonazione

Cos'è il subcloning?

Il subcloning è una procedura per spostare un gene di interesse da un vettore ad un altro vettore per vedere l'espressione del gene per ottenere la funzionalità desiderata del gene. In questo metodo, sono coinvolti due vettori; vale a dire, vettore genitore e vettore di destinazione. Gli inserimenti clonati vengono nuovamente spostati in un secondo vettore in subcloning. L'obiettivo del trasferimento del gene dal primo vettore al secondo vettore è quello di ottenere qualcosa che non potrebbe essere fatto dal primo vettore o di separare un gene nuovamente all'interno del frammento già clonato del DNA e di esprimerlo da solo. Gli enzimi di restrizione sono utilizzati in questa procedura all'inizio.

Procedura di subclonazione

I passaggi di base del subcloning sono i seguenti.

1. Con l'aiuto delle endonucleasi di restrizione, separazione del DNA di interesse nel plasmide del donatore (vettore genitore).
2. Amplificazione del DNA di interesse mediante PCR.
3. Purificazione del prodotto di PCR (DNA di interesse) mediante elettroforesi su gel.
4. Apertura del plasmide ricevente mediante le stesse endonucleasi di restrizione usate per separare il DNA di interesse nel plasmide genitore.
5. Legatura del DNA di interesse (gene) nel plasmide ricevente per creare il plasmide subclonato.
6. Trasformazione del vettore sottoclonato in un batterio ospite competente.
7. Screening di celle trasformate.
8. Purificazione del DNA plasmidico e uso per il sequenziamento del DNA o espressione dei geni per ottenere i prodotti desiderati.

La subclonazione viene effettuata in occasioni di isolamento di un gene dal gruppo di geni clonati o quando è richiesto il trasferimento del gene di interesse in un plasmide utile per vedere l'esatta funzione del gene di interesse.

Figura02: procedura di subcloning

Qual è la differenza tra Clonazione e Sottolone?

Clonazione vs Sottoclona
La clonazione è la procedura che produce organismi o cellule geneticamente identici.	Il subcloning è una procedura per spostare un gene di interesse da un vettore ad un altro vettore per vedere l'espressione del gene per ottenere la funzionalità desiderata del gene.
Processi
Separa il DNA di interesse dall'organismo e inserito in un vettore una volta e clonato	Il DNA già clonato viene separato dal primo vettore e inserito in un secondo vettore e clonato.
Inserisci movimento tramite i vettori
Non sposta gli inserti (DNA di interesse) da un vettore a un altro vettore.	Sposta gli inserti dal vettore principale al vettore di destinazione.

Riepilogo - Clonazione vs Sottoclone

La clonazione crea cellule o organismi geneticamente identici con il gene inserito o il DNA di interesse. Procede attraverso la separazione e l'inserimento del DNA di interesse in un vettore ed espressione all'interno di un batterio ospite. La sottoclonia condivide passi simili con la clonazione. Tuttavia, in subcloning, il frammento di DNA già clonato (gene di interesse) viene inserito in un vettore e trasformato in un batterio ospite. Questa è la differenza chiave tra clonazione e sottoclone.

Riferimenti

1. Lodish, Harvey. "DNA Clonazione con Vettori Plasmidici." Biologia molecolare cellulare. 4a edizione. U.S. National Library of Medicine, 01 gennaio 1970. Web. 05 marzo 2017
2. “Subcloning.” Wikipedia. Wikimedia Foundation, 14 febbraio 2017. Web. 06 marzo 2017
3. "Subcloning." Sottoclone | Articoli ad accesso aperto | Riviste ad accesso aperto | Atti del convegno | Editors | Autori | Revisori | eventi scientifici. N., n. Web. 06 marzo 2017
4. Wackerhage, Henning. "Come eseguire la sottoclone." Come eseguire la sottoclone. N., 01 gennaio 1970. Web. 06 marzo 2017

Cortesia dell'immagine

1. Procedura di clonazione molecolare - Da CNX OpenStax [CC BY 4.0], attraverso Wikimedia Commons
2. Procedura di subclonazione - L'autore del caricamento originale era Takometer di Wikipedia in inglese (trasferito da en.wikipedia a Commons) [CC BY 2.5], attraverso Wikimedia Commons