Differenza tra RT-PCR e QPCR

Reazione a catena della polimerasi di trascrizione inversa (RT-PCR)

RT-PCR vs. QPCR

I progressi nella biotecnologia hanno portato alla scoperta di diversi modi per far fronte alle richieste di trapianto di organi nel corso degli anni. Prima, un individuo che volesse donare volontariamente qualsiasi organo immediatamente dopo la morte a un paziente bisognoso, potrebbe solo avviare di nuovo l'operazione per i trapianti. Gli studi e la ricerca continui dei biologi portano alla scoperta di cellule staminali.

Le cellule staminali si riferiscono a quelle che vengono prese dal DNA di un embrione, che servirà come fonte per la rigenerazione delle cellule che sarebbe fondamentalmente un clone dell'organo in cui il DNA è stato recuperato. Mentre gli attivisti per i diritti umani fanno pressione per fermare queste procedure, le operazioni di successo hanno dimostrato l'efficacia degli sviluppi delle cellule staminali nei trapianti di organi.

Prima che si possa apprezzare e comprendere appieno le cellule staminali, tuttavia, è necessario essere familiarizzati con le diverse terminologie associate a questa scoperta scientifica. La coltivazione di cellule staminali si occupa del DNA e della sua codifica. Pertanto, è fondamentale per gli studenti o per gli individui interessati al campo differenziare tra RT-PCR e qPCR.

La reazione a catena della polimerasi a trascrizione inversa (RT-PCR) è una delle molte varianti della reazione a catena della polimerasi, o PCR. Questa tecnica di laboratorio è ampiamente utilizzata in biologia molecolare per consentire agli scienziati di produrre copie multiple di una particolare sequenza di DNA attraverso un processo coniato come "amplificazione". La differenza tra RT-PCR e PCR tradizionale è che l'RNA viene dapprima trascritto al contrario in il suo complemento del DNA, che utilizza la trascrittasi inversa. Il nuovo DNA complementare contenente la trascrizione invertita verrà quindi amplificato utilizzando la PCR tradizionale o la PCR in tempo reale.

La maggior parte degli studenti che studiano questo processo spesso commettono l'errore di scambiare la PCR della trascrizione inversa e la PCR in tempo reale poiché i due sono abbreviati in modo simile. Per evitare confusione, i biologi etichettano la PCR in tempo reale come PCR quantitativa in tempo reale o qPCR.

QPCR differisce notevolmente dalla RT-PCR, in quanto qPCR è responsabile della misurazione dell'amplificazione nel momento in cui si verifica. Si può dire che RT-PCR avvia il processo di amplificazione, mentre qPCR lo misura mentre la procedura ha luogo.

PCR quantitativa in tempo reale

QPCR ha effettivamente rivoluzionato il metodo tradizionale di approccio unidirezionale per quanto riguarda la quantificazione del DNA e dell'RNA, poiché l'applicazione del metodo qPCR consente ai biologi di determinare la concentrazione iniziale dell'acido nucleico anche prima che i risultati della reazione siano stati osservati e annotato.

L'applicazione di qPCR, che ora è considerata la tecnica di analisi più potente e sensibile per gli studi genetici, si è notevolmente ampliata. Attualmente è coinvolto nell'analisi quantitativa dell'espressione genica, genotipizzazione, rilevamento di patogeni e analisi di SNP, insieme a misurazioni di interferenza del RNA.

Il QPCR è spesso combinato con il processo di trascrizione inversa per quantificare l'RNA messaggero e il MicroRNA presenti nelle cellule dei tessuti osservati e sperimentati. Ciò fornisce quindi un'altra differenza visibile tra i due: RT-PCR può essere utilizzato per il processo di amplificazione, ma deve essere fuso con qPCR per scopi di quantificazione.

QPCR è anche noto per essere più quantitativo in quanto i dati possono essere raccolti man mano che la fase di crescita esponenziale (log) della PCR progredisce. I biologi notano che la quantità del sottoprodotto della PCR è direttamente proporzionale alla quantità di acido nucleico della matrice che sarà misurata attraverso qPCR.

D'altra parte, la RT-PCR è lontana dall'avere una natura quantitativa in quanto l'osservanza dell'intensità della banda amplificata su un gel seguendo lo standard stabilito di una concentrazione può portare ad avere inferenze "semi-quantitative".

Sommario:

1.QPCR e RT-PCR sono entrambi termini utilizzati in biotecnologia e utilizzati per la produzione di più copie del DNA.
2.RT-PCR è usato per amplificare la trascrizione inversa del codice del DNA; QPCR misura l'amplificazione.
3.RT-PCR è per l'amplificazione, mentre qPCR è per la quantificazione.
4.QPCR è di natura quantitativa, mentre RT-PCR non lo è.